抗HFRSV血凝素抗原3G₁ McAb經(jīng)體內(nèi)、外研究證實該McAb具有高中和活性及高保護活性。為了企圖將其應用于人體內(nèi)進行特異治療的目的，本文用基因工程技術，從分泌3G1-McAb的雜交瘤細胞系培養(yǎng)中分別提取基因組DNA和總RNA后反轉錄成cDNA。用2套引物進行PCR擴增McAb的V_H基因。一套引物設計有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位點。引物中含有起始密碼和終止密碼，主要用于從基因組DNA中擴增3G1V_H基因，并在大腸桿菌中表達。一套引物設計有PstⅠ和BstE Ⅱ酶切位點，用于從3G1cDNA中擴增V_H基因，并以期在真核細胞表達鼠-人嵌合抗體。經(jīng)過1～3輪的PCR擴增，每輪均擴增30個循環(huán)，2套引物經(jīng)擴增均獲得約350bp大小的PCR產(chǎn)物。分別將從DNA及cDNA得到的PCR產(chǎn)物克隆到pUC19和M13mp18／19載體中。得到的陽性重組克隆用雙脫氧核苷酸鏈末端終止法，分別在雙鏈重組pUC19及單鏈M13模板中進行了3G1VH基因的核苷酸序列分析。結果表明，兩種途

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學位級別】：博士

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前言
文獻回顧
    1.制備基因抗體的結構基礎
    2.基因工程抗體的種類及特性
    3.基因工程抗體的構建及表達
    4.基因工程抗體的應用
    5.基因工程抗體的發(fā)展前景
第一部分：3G₁-McAb V_H DNA的克隆及序列分析
    材料與方法
        1.實驗材料
        2.實驗方法
    結果
    討論
第二部分：3G₁-McAb V_H cDNA的克隆及序列分析
    材料和方法
        1.材料
        2.方法
    結果
    討論
第三部分：3G₁ McAb V_H基因在大腸桿菌中的表達及初步鑒定
    材料和方法
        1.材料
        2.方法
    結果
    討論
小結
參考文獻
致謝



本文編號：4003672