抗HFRSV血凝素抗原3G₁ McAb經(jīng)體內(nèi)、外研究證實(shí)該McAb具有高中和活性及高保護(hù)活性。為了企圖將其應(yīng)用于人體內(nèi)進(jìn)行特異治療的目的，本文用基因工程技術(shù)，從分泌3G1-McAb的雜交瘤細(xì)胞系培養(yǎng)中分別提取基因組DNA和總RNA后反轉(zhuǎn)錄成cDNA。用2套引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增McAb的V_H基因。一套引物設(shè)計(jì)有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位點(diǎn)。引物中含有起始密碼和終止密碼，主要用于從基因組DNA中擴(kuò)增3G1V_H基因，并在大腸桿菌中表達(dá)。一套引物設(shè)計(jì)有PstⅠ和BstE Ⅱ酶切位點(diǎn)，用于從3G1cDNA中擴(kuò)增V_H基因，并以期在真核細(xì)胞表達(dá)鼠-人嵌合抗體。經(jīng)過(guò)1～3輪的PCR擴(kuò)增，每輪均擴(kuò)增30個(gè)循環(huán)，2套引物經(jīng)擴(kuò)增均獲得約350bp大小的PCR產(chǎn)物。分別將從DNA及cDNA得到的PCR產(chǎn)物克隆到pUC19和M13mp18／19載體中。得到的陽(yáng)性重組克隆用雙脫氧核苷酸鏈末端終止法，分別在雙鏈重組pUC19及單鏈M13模板中進(jìn)行了3G1VH基因的核苷酸序列分析。結(jié)果表明，兩種途

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
英文縮寫(xiě)詞表
中文摘要
英文摘要
前言
文獻(xiàn)回顧
    1.制備基因抗體的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)
    2.基因工程抗體的種類及特性
    3.基因工程抗體的構(gòu)建及表達(dá)
    4.基因工程抗體的應(yīng)用
    5.基因工程抗體的發(fā)展前景
第一部分：3G₁-McAb V_H DNA的克隆及序列分析
    材料與方法
        1.實(shí)驗(yàn)材料
        2.實(shí)驗(yàn)方法
    結(jié)果
    討論
第二部分：3G₁-McAb V_H cDNA的克隆及序列分析
    材料和方法
        1.材料
        2.方法
    結(jié)果
    討論
第三部分：3G₁ McAb V_H基因在大腸桿菌中的表達(dá)及初步鑒定
    材料和方法
        1.材料
        2.方法
    結(jié)果
    討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：4003672