發(fā)布時(shí)間：2018-02-26 02:09

  本文關(guān)鍵詞： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 神經(jīng)元樣細(xì)胞 膽堿能神經(jīng)元樣細(xì)胞 分化　出處：《南昌大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的探討人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMMSCs)的體外分離、純化、擴(kuò)增和向膽堿能神經(jīng)元樣細(xì)胞的定向分化潛能,以期為BMMSCs的神經(jīng)移植提供理論依據(jù)。 方法應(yīng)用密度梯度離心法體外分離出BMMSCs,在含10%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基)擴(kuò)增和傳代,用流式細(xì)胞儀檢測BMMSCs的表面標(biāo)志。利用擴(kuò)增后的第二代BMMSCs進(jìn)行誘導(dǎo)分化,分為實(shí)驗(yàn)組和對照組。實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞先用含40mg/L WHI-P131的完全培養(yǎng)基預(yù)處理48小時(shí)后,在含10ng/ml重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)的完全培養(yǎng)基中預(yù)誘導(dǎo)24小時(shí),最后以含1μmol/L全反式維甲酸(ATRA)和10ng/ml音速波狀蛋白(Shh)的完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)5小時(shí);對照組不加任何誘導(dǎo)劑。誘導(dǎo)過程中在相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化,然后進(jìn)行神經(jīng)元特異烯醇化酶(NSE)、神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)和乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(ChAT)等神經(jīng)細(xì)胞特異性標(biāo)志的免疫細(xì)胞化學(xué)染色,并分別計(jì)算陽性細(xì)胞百分率。 結(jié)果分離擴(kuò)增后的BMMSCs強(qiáng)表達(dá)CD29;較強(qiáng)表達(dá)CD44、CD166和CD105;不表達(dá)CD45、CD34和HLA-DR。實(shí)驗(yàn)組BMMSCs經(jīng)誘導(dǎo)后均能分化為具有典型神經(jīng)元形態(tài)的細(xì)胞,并表達(dá)NSE(61.00±3.63)%、GFAP(14.42±2.74)%;且相當(dāng)部分神經(jīng)元樣細(xì)胞表達(dá)ChAT(9.92±1.29)%。對照組BMMSCs細(xì)胞形態(tài)無明顯變化,且上述特異性標(biāo)志物表達(dá)均為陰性。 結(jié)論BMMSCs可跨胚層分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞和膽堿能神經(jīng)元樣細(xì)胞。
[Abstract]:Objective to investigate the potential of human bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs) in isolation, purification, expansion and differentiation potential to cholinergic neuron like cells in vitro, so as to provide a theoretical basis for BMMSCs neural transplantation.
Methods using density gradient centrifugation in vitro isolated BMMSCs culture medium containing 10%FBS DMEM/F12 (complete medium) amplification and passages, with the surface markers of BMMSCs by flow cytometry. The differentiation of the amplification of the second generation of BMMSCs, divided into experimental group and control group. The experimental group cells with 40mg/L WHI-P131 complete medium pretreatment after 48 hours in 10ng/ml containing recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF) in complete medium pre induced for 24 hours, finally with 1 mol/L of all trans retinoic acid (ATRA) and 10ng/ml protein (Shh) of the sonic wave induced by complete medium 5 h; the control group without any inducer. Induction of cell morphological changes were observed under phase contrast microscope and neuron specific enolase (NSE), glial fibrillary acidic protein (GFAP) and choline acetyltransferase (ChAT) nerve Immunocytochemical staining of cell specific markers, and the percentage of positive cells were calculated respectively.
The separation of amplified BMMSCs strong expression of CD29; strong expression of CD44, CD166 and CD105; the expression of CD45 CD34 and HLA-DR. BMMSCs in the experimental group after induction can differentiate into typical neuronal morphology of cells, and the expression of NSE (61 + 3.63)%, GFAP (14.42 + 2.74)%; and a considerable part of neurons the expression of ChAT like cells (9.92 + 1.29)%. The control group of BMMSCs cells had no significant morphological changes, and the specific markers were negative.
Conclusion BMMSCs can differentiate into neuron like and cholinergic neuron like cells.

【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R329

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與肝細(xì)胞修復(fù)及組織重構(gòu)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年23期

2 林治平;曾榮;胡資兵;林顥;;Wnt信號通路與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)分化[J];廣東醫(yī)學(xué);2011年08期

3 王長軍;殷國勇;李翔;沈國強(qiáng);;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與成骨細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)對成骨細(xì)胞增殖的影響[J];江蘇醫(yī)藥;2011年11期

4 張英博;楊大平;;干細(xì)胞用于創(chuàng)傷修復(fù)的新進(jìn)展[J];中國美容醫(yī)學(xué);2011年08期

5 石洋;袁偉;;中藥誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;2010年05期

6 羅俊;顧文娟;徐禮;李江;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療對心肌梗死后心功能的影響[J];醫(yī)學(xué)與哲學(xué)(臨床決策論壇版);2011年06期

7 劉嘉祺;林峰;李孟全;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及生物學(xué)特性[J];牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年03期

8 劉偉;趙勁民;蘇偉;李曉峰;秦義武;;柚皮苷對兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞的影響[J];江蘇醫(yī)藥;2011年14期

9 程書榜;王成友;洪建琴;范子冰;胡迎春;;同種骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈輸注對大鼠CD4~+、CD8~+T淋巴細(xì)胞和IL-10、IL-2、TNF-α的影響[J];消化腫瘤雜志(電子版);2010年01期

10 李軍;杜金榮;戴艷萍;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠腦梗死的研究[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2011年09期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 劉昱;宋健;陳錫昌;胡成俊;劉維新;;體外“心肌環(huán)境”誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的研究[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

2 馮凱;陳健琳;烏仁娜;徐晨;李欲航;陳虎;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞抑制異體T細(xì)胞反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[A];第三屆全國血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2003年

3 宮立眾;夏順中;張翼軍;張紅賓;史曦凱;鐘大平;裴莉;張勇;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中大小兩群細(xì)胞的生物學(xué)特性比較[A];第九屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

4 徐衛(wèi);李建勇;朱光榮;費(fèi)曉明;孟麗娟;周小玉;汪承亞;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)的臨床研究[A];第九屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

5 孫樹津;后曉南;胡江;龍勉;陶祖萊;;模擬微重力條件下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)[A];中國空間科學(xué)學(xué)會(huì)空間生命專業(yè)委員會(huì)2003年中國空間生命科學(xué)與航天醫(yī)學(xué)會(huì)議論文摘要集[C];2003年

6 劉昱;宋健;陳錫昌;胡成俊;劉維新;;5-氮胞苷誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分化的研究[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

7 樓曉;陳虎;江飛子;馮凱;江岷;胡亮釘;徐晨;李欲航;李渤濤;俞志勇;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞支持造血重建的研究[A];第九屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

8 孫樹津;后曉南;龍勉;陶祖萊;;力學(xué)環(huán)境因素與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖與分化[A];第七屆全國生物力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2003年

9 張偉;葛薇;李長虹;韓欽;鄧為民;尤勝國;趙春華;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對單核細(xì)胞來源的樹突狀細(xì)胞分化、成熟和功能的影響[A];第九屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

10 李艷華;張銳;秦立蓬;趙連旭;王蘊(yùn)芳;岳文;裴雪濤;;重組腺病毒載體pAd-pdx-1的構(gòu)建及其在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)[A];第九屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前4條

1 趙煒;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可減輕排異反應(yīng)[N];健康報(bào);2004年

2 本報(bào)記者 吳潔;為實(shí)現(xiàn)“人體配件工廠”的夢想[N];科技日報(bào);2002年

3 記者　秦軍　;“萬能細(xì)胞”巧治心臟病[N];浙江日報(bào);2004年

4 本報(bào)記者 張曄;骨髓干細(xì)胞移植治心梗成功[N];科技日報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李海生;低氧促進(jìn)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和分化及其機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

2 史達(dá);木豆葉聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療股骨頭壞死的實(shí)驗(yàn)與相關(guān)臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2007年

3 顧紹峰;兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為角膜上皮樣細(xì)胞的體外研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2008年

4 張偉;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

5 張海峰;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對大鼠急性肝功能衰竭治療作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2007年

6 牟大鵬;抑制消減雜交技術(shù)篩選骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化前后差異表達(dá)基因[D];吉林大學(xué);2007年

7 景紅;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)為腎臟系膜細(xì)胞樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

8 宋可新;黑色素細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合構(gòu)建組織工程皮膚的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

9 滕春燕;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對急性胰腺炎損傷修復(fù)及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2009年

10 任曉勇;人生長分化因子-5基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及用于軟骨缺損修復(fù)的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 項(xiàng)正兵;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向膽堿能神經(jīng)元樣細(xì)胞定向分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];南昌大學(xué);2007年

2 陳書尚;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心力衰竭的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2005年

3 劉宏志;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)前體細(xì)胞的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

4 王艷芳;生物反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞[D];大連理工大學(xué);2006年

5 陳潔;同種異體移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠心梗后心室重構(gòu)[D];浙江大學(xué);2006年

6 劉弘光;嘗試移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠糖尿病[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

7 董玉泉;兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定及生物學(xué)特性研究[D];青島大學(xué);2006年

8 周哲;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞bFGF復(fù)合降解膜修復(fù)皮膚缺損的研究[D];吉林大學(xué);2008年

9 賈小力;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈移植對損傷大鼠脊髓VEGF、bFGF表達(dá)及血管新生的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2008年

10 劉書會(huì);局部應(yīng)用血管內(nèi)皮生長因子及間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)物提高皮瓣成活率的實(shí)驗(yàn)性研究[D];吉林大學(xué);2009年

，

本文編號：1536076