發(fā)布時間：2018-02-25 21:21

  本文關(guān)鍵詞： Tim-2基因 BALB/c小鼠 L929細(xì)胞 真核表達(dá) 鐵蛋白 Tim-2基因 昆明小鼠 單核苷酸多態(tài)性　出處：《華中科技大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 第一部分小鼠Tim-2基因在L929細(xì)胞表達(dá)后促進(jìn)鐵蛋白的內(nèi)吞 目的:獲取BALB/c小鼠T細(xì)胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白-(2T cell immunoglobulin and mucin domain containing molecules-2, Tim-2)基因,構(gòu)建真核表達(dá)載體在L929細(xì)胞中表達(dá)并研究其功能。 方法:RT-PCR獲取BALB/c小鼠Tim-2基因,T-A克隆后經(jīng)測序鑒定后酶切,插入pEGFP-N1真核表達(dá)載體,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染L929細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察外源基因的表達(dá),然后加入鐵蛋白與轉(zhuǎn)染細(xì)胞作用。 結(jié)果:外源基因在L929細(xì)胞中得到高效表達(dá),熒光顯微鏡的結(jié)果顯示,外源基因定位于細(xì)胞膜上,并能促進(jìn)細(xì)胞對鐵蛋白的內(nèi)吞。 結(jié)論:Tim-2基因在真核細(xì)胞中表達(dá)后定位于細(xì)胞膜上,并促進(jìn)細(xì)胞對鐵蛋白的內(nèi)吞。 第二部分昆明小鼠Tim-2基因的單個核苷酸變異的研究 目的:研究T細(xì)胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白(T cell immunoglobulin-and mucin-domain-containing molecules, Tim)基因家族的成員之一  Tim-2基因在昆明鼠體內(nèi)的單核苷酸多態(tài)性,以提示昆明鼠在腫瘤學(xué)和免疫學(xué)的相關(guān)試驗中有可能出現(xiàn)的與國際通用的其它品系小鼠(如BALB/c小鼠)不同的生物學(xué)特性。 方法:取不同來源的五只昆明小鼠的肝組織,提取總RNA后逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA,使用特異性引物通過PCR擴(kuò)增得到Tim-2基因,克隆后測序,然后比較測序圖譜。 結(jié)果:測序結(jié)果與Genebank中的Tim-2序列相比,451(TCC→GCC:絲氨酸→丙氨酸),502,504(CCA→TCT:脯氨酸→絲氨酸),586,587(GAT→TCT:天冬氨酸→絲氨酸)。其他變異位點無氨基酸改變。 結(jié)論:提示昆明小鼠與國際通用的其它品系小鼠(如BALB/c小鼠)Tim-2基因所編碼的蛋白質(zhì)序列有差異,在使用昆明小鼠進(jìn)行免疫學(xué)相關(guān)的試驗研究的過程中應(yīng)該注意到由于這種不同所造成的對實驗結(jié)果的影響。
[Abstract]:The first part of mouse Tim-2 gene expression in L929 cells promotes the endocytosis of ferritin. Aim: to construct the eukaryotic expression vector of BALB/c mouse T cell immunoglobulin domain mucin domain protein (-TX) -2T cell immunoglobulin and mucin domain containing (Tim-2) gene, and to study its function in L929 cells. Methods BALB/c mouse Tim-2 gene was cloned by RT-PCR and sequenced, then inserted into pEGFP-N1 eukaryotic expression vector. L929 cells were transfected with liposome. The expression of exogenous gene was observed by fluorescence microscope, then ferritin was added to the transfected cells. Results: the extraneous gene was highly expressed in L929 cells. Fluorescence microscopy showed that the exogenous gene was located on the cell membrane and could promote the uptake of ferritin in L929 cells. Conclusion the expression of the gene was located on the cell membrane and promoted the endocytosis of ferritin in the eukaryotic cells. Part II study on single nucleotide variation of Tim-2 gene in Kunming mice. Objective: to study the single nucleotide polymorphism of Tim-2 gene of T cell cell immunoglobulin-and mucin-domain-containing (Tims) gene in Kunming mice. These results suggest that Kunming mice may have different biological characteristics from other strains of mice (such as BALB/c mice) in oncology and immunology. Methods: the liver tissues of five Kunming mice from different sources were taken, the total RNA was extracted by reverse transcription, the Tim-2 gene was amplified by PCR with specific primers, cloned and sequenced, and then the sequence map was compared. Results: compared with the Tim-2 sequence in Genebank, the result of sequencing was 451 TCCs. 鈫扜CC: serine. 鈫扐lanine stoma 502CBA 504CCA. 鈫扨roline. 鈫扴erine 586 GAT. 鈫扐spartic acid. 鈫扴erine. No amino acid changes at other mutation sites. Conclusion: the results suggest that there are differences in protein sequences between Kunming mice and other strains of mice (such as BALB/c mice). The effect of this difference on the experimental results should be taken into account in the use of Kunming mice in immunological related experimental studies.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周東;張毅;粱道明;袁勇;李思齊;曾德妙;陳嘉勇;;生長激素受體靶向siRNA聯(lián)合5-FU對人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的影響[J];中國普通外科雜志;2011年07期

2 沈海旺;李兵;蘇文金;曹敏杰;蔡秋鳳;劉光明;;鋸緣青蟹原肌球蛋白的過敏動物模型研究[J];免疫學(xué)雜志;2011年07期

3 張強(qiáng);張磊;李兵;費舟;李娟;曹寶萍;;烏司他丁預(yù)處理對小鼠顱腦損傷保護(hù)的初步研究[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2011年03期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相關(guān)會議論文 前10條

1 王三龍;李偉;苗玉發(fā);姜華;劉芳;李珊珊;孟建華;沈連忠;李保文;王秀文;李波;李秉坤;;以HSV-1為載體的OrienX010肌肉注射給予BALB/c小鼠的臨床前安全性評價研究[A];中國毒理學(xué)會第五次全國學(xué)術(shù)大會論文集[C];2009年

2 王鵬;陳蘇寧;張玉芳;楊積武;;益心康對柯薩奇B_(3m)病毒性心肌炎小鼠作用的實驗研究[A];全面建設(shè)小康社會：中國科技工作者的歷史責(zé)任——中國科協(xié)2003年學(xué)術(shù)年會論文集（下）[C];2003年

3 何慶華;魏志超;方桂杰;王玉蓮;周詩其;王大菊;范盛先;袁宗輝;;喹賽多對Balb／c小鼠的皮膚光敏毒性研究[A];2006年全國藥物毒理學(xué)會議論文集[C];2006年

4 豆文波;程安春;汪銘書;希尼尼根;陳希文;劉菲;陳孝躍;;原位PCR檢測基因槍轟擊和肌肉注射PRRSV ORF5基因疫苗在BALB/c小鼠體內(nèi)動態(tài)分布規(guī)律研究[A];第六屆全國會員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2005年

5 豆文波;程安春;汪銘書;希尼尼根;陳希文;劉菲;陳孝躍;;原位雜交檢測基因槍轟擊和肌肉注射PRRSV ORF5基因疫苗在BALB/c小鼠體內(nèi)動態(tài)分布規(guī)律研究[A];第六屆全國會員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2005年

6 付宏偉;涂碩;朱偉鋒;李華;劉麗喬;萬福生;;白英抗癌活性組分的篩選及抗肺癌A549機(jī)制的觀察[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2008年學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2008年

7 施理;孔祥平;易學(xué)瑞;劉惠萍;祖萍;張宜俊;;小鼠接種HBV疫苗引起的特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)[A];第6次全國微生物學(xué)與免疫學(xué)大會論文摘要匯編[C];2004年

8 豆文波;程安春;汪銘書;希尼尼根;陳希文;劉菲;陳孝躍;劉芳;;PCR檢測基因槍轟擊和肌肉注射不同劑量PRRSV ORF_5基因疫苗在BALB/c小鼠體內(nèi)分布規(guī)律研究[A];第六屆全國會員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2005年

9 豆文波;程安春;汪銘書;希尼尼根;陳希文;劉芳;劉菲;陳孝躍;;基因槍轟擊和肌肉注射不同劑量PRRSV ORF5基因疫苗在BALB/c小鼠體內(nèi)動態(tài)表達(dá)規(guī)律研究[A];第六屆全國會員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2005年

10 祝洪瀾;崔恒;馮捷;魏麗惠;;抗獨特型微抗體疫苗免疫方案的動物實驗[A];第八次全國婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 何偉;長期多代飲奶對鼠小腸乳糖酶活性及mRNA水平的影響研究[D];四川大學(xué);2004年

2 劉曉安;C-erbB-2反義寡核苷酸治療乳腺癌的實驗研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2005年

3 陳徹;富硒姬松茸提取物硒蛋白多糖在體內(nèi)與體外的抗腫瘤效果研究[D];蘭州大學(xué);2008年

4 蓋顯英;利用BALB/C小鼠及其原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞研究川金絲猴源CVB3的致病性[D];吉林大學(xué);2009年

5 方廖瓊;羊胎盤免疫調(diào)節(jié)因子的免疫促進(jìn)作用及其機(jī)理研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

6 易俊林;放射誘導(dǎo)的腦組織損傷機(jī)理及中藥的保護(hù)作用[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

7 陳光;Tregs調(diào)控瘧疾保護(hù)性免疫應(yīng)答和免疫病理效應(yīng)機(jī)制的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2008年

8 何葵;進(jìn)展期結(jié)直腸癌低白蛋白血癥形成機(jī)制及治療的臨床實驗研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2008年

9 李巖;抗HP嗜酸乳桿菌和抗CagA～+HP噬菌體多肽的篩選及其對HP感染C57BL/6小鼠預(yù)防及治療效應(yīng)分析[D];吉林大學(xué);2007年

10 劉英姿;碎米花杜鵑提取物原花青素A-1免疫活性研究[D];吉林大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 黃勁松;小鼠Tim-2基因在L929細(xì)胞表達(dá)后促進(jìn)鐵蛋白的內(nèi)吞[D];華中科技大學(xué);2007年

2 胡友瑩;中西藥聯(lián)合治療幽門螺桿菌相關(guān)性胃炎的實驗研究[D];安徽理工大學(xué);2006年

3 舒德忠;鹽酸小檗堿對實驗性小鼠結(jié)腸炎的作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

4 梁娜;棕色田鼠與BALB/c小鼠行為型的比較研究[D];延安大學(xué);2009年

5 李金鳳;Q熱立克次體感染小鼠的實驗病理學(xué)研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

6 余丹丹;兩株H5N1亞型禽流感病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

7 韓文杰;低氧預(yù)適應(yīng)對小鼠視網(wǎng)膜光損傷保護(hù)作用的超微結(jié)構(gòu)觀察[D];青島大學(xué);2005年

8 趙路易;豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定和感染裸鼠、Balb/c小鼠的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

9 張星;抗獨特型單克隆抗體制備的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

10 別明江;人源乳酸桿菌對幽門螺桿菌性胃炎模型的治療研究[D];四川大學(xué);2006年

，

本文編號：1535189