發(fā)布時(shí)間：2018-02-14 07:00

  本文關(guān)鍵詞： 單純皰疹病毒1 型 截短糖蛋白B 基因 角膜炎 基因疫苗　出處：《吉林大學(xué)》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:構(gòu)建用于防治單純皰疹病毒性角膜炎的核酸疫苗并進(jìn)行初步免疫學(xué)研究,探討HSV-1 截短糖蛋白B 基因作為基因疫苗的可能性。 方法:利用PCR 技術(shù)從HSV-1 SM44 株基因組中擴(kuò)增出HSV-gB 的截短基因片斷gBt(1482bp),去掉了胞內(nèi)區(qū),跨膜區(qū),信號(hào)肽中N 端39bp 和部分胞外區(qū)的基因序列,只包含部分信號(hào)肽序列和部分胞外區(qū)基因序列,將其定向插入真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3 載體中,構(gòu)建出重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-gBt,并對其進(jìn)行酶切分析、PCR 鑒定及測序鑒定;,用pcDNA-gBt 三次肌肉接種小鼠后,通過中和試驗(yàn)、ELISA 方法檢測中和抗體滴度觀察免疫效果,以單純皰疹病毒攻擊小鼠觀察pcDNA-gBt 對小鼠的免疫保護(hù)作用。 結(jié)果:雙酶切重組質(zhì)粒pcDNA-gBt,電泳可見兩條帶,分別為目的基因(1.5kb)和線性質(zhì)粒pcDNA3(5.4kb);以重組質(zhì)粒pcDNA-gBt 為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增,在1.5kb 位置擴(kuò)增出特異的產(chǎn)物;測序結(jié)果表明,克隆基因插入方向正確,與GeneBank 中登錄的HSV-1F 株gB 基因序列比較,同源性達(dá)99.5%;實(shí)驗(yàn)小鼠產(chǎn)生了對HSV-1 特異性的抗體(抗體滴度:中和試驗(yàn)法1:61,ELISA 法1:406),以HSV-1 對小鼠進(jìn)行病毒攻擊(存活率80%)。 結(jié)論:成功地構(gòu)建了重組真核表達(dá)質(zhì)粒單純皰疹病毒糖蛋白B 截短基因疫苗,用其免疫小鼠可以誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng),并具有免疫保護(hù)作用;為進(jìn)一步構(gòu)建病毒糖蛋白聯(lián)合疫苗并最終用于單皰病毒角膜炎的預(yù)防和治療奠定理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:Aim: to construct a nucleic acid vaccine for the prevention and treatment of herpes simplex keratitis and to investigate the possibility of HSV-1 truncated glycoprotein B gene as gene vaccine. Methods: the truncated gene fragment of HSV-gB was amplified from the genome of HSV-1 SM44 strain by PCR technique, and the gene sequence of the N terminal and some extracellular region were removed, including the intracellular region, the transmembrane region, the N-terminal region and the partial extracellular region. Only some signal peptide sequences and some extracellular domain gene sequences were inserted into eukaryotic expression plasmid pcDNA3 vector. The recombinant eukaryotic expression plasmid pcDNA-gBtwas constructed, and the recombinant plasmid pcDNA-gBtwas identified by restriction endonuclease analysis and sequencing. After the mice were inoculated with pcDNA-gBt for three times, the titer of neutralizing antibody was detected by neutralization Elisa. The immune protective effect of pcDNA-gBt on mice was observed with herpes simplex virus (HSV) attack. Results: the recombinant plasmid pcDNA-gBt was digested with two bands, the target gene was 1.5 kb) and the linear plasmid pcDNA3 was 5.4 kb. The recombinant plasmid pcDNA-gBt was used as template to amplify the specific product at 1.5kb. The cloned gene was inserted in the correct direction and had 99.5 homology compared with the GB gene sequence of HSV-1F strain registered in GeneBank. The experimental mice produced specific antibody to HSV-1 (antibody titer: neutralization test 1: 61) Elisa method 1: 406, and HSV-1 was used to attack the mouse virus (survival rate 80%). Conclusion: the recombinant eukaryotic expression plasmid truncated gene vaccine of glycoprotein B of herpes simplex virus was successfully constructed. It lays a theoretical foundation for the further construction of virus glycoprotein combined vaccine and its application in the prevention and treatment of herpes simplex keratitis.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R392

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳靜;李玉峰;宋敏訓(xùn);黃兵;馬秀麗;李峰;;雞α-干擾素在畢赤酵母中的分泌表達(dá)、純化及其抗病毒活性測定[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年01期

2 王成明;雞傳染性法氏囊病病毒的提純和鑒定[J];安徽技術(shù)師范學(xué)院學(xué)報(bào);1992年02期

3 王成明,陳傅言,蔡寶祥;抗雞傳染性法氏囊病病毒單克隆抗體中和株的建立[J];安徽技術(shù)師范學(xué)院學(xué)報(bào);1993年01期

4 王成明，，蔡寶祥，陳溥言;雙抗體ELISA檢測雞傳染性法氏囊病病原[J];安徽農(nóng)業(yè)技術(shù)師范學(xué)院學(xué)報(bào);1995年03期

5 徐普庭,王逸民,趙子江,龔正達(dá),游志勇;云南省兩株環(huán)狀病毒的分離和鑒定[J];病毒學(xué)報(bào);1988年03期

6 徐普庭,王逸民,左建民,林靜雯,徐丕模;從云南省無名熱病人和腦炎病人分離到新環(huán)狀病毒[J];病毒學(xué)報(bào);1990年01期

7 李槿年,杜念興,徐為燕;實(shí)驗(yàn)兔接種兔病毒性出血癥病毒疫苗后的免疫應(yīng)答[J];病毒學(xué)報(bào);1990年02期

8 羅廷榮,余克倫,韋家槐;ABC-ELISA檢測雞新城疫病毒[J];病毒學(xué)報(bào);1990年03期

9 江育林,李正秋;病毒感染的草魚細(xì)胞產(chǎn)生類干擾素物質(zhì)的研究[J];病毒學(xué)報(bào);1991年01期

10 張振燕,劉衍春,呂群;人羊膜細(xì)胞WISH株液氮凍存及復(fù)蘇培養(yǎng)[J];中國輸血雜志;1995年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 孟祥俊;HSV-1糖蛋白B基因疫苗的構(gòu)建及其預(yù)防單純皰疹病毒性眼病的初步研究[D];吉林大學(xué);2007年

2 肖長江;小兒熱哮微觀辨證及清肺平喘法的療效機(jī)理研究[D];湖南中醫(yī)學(xué)院;2001年

3 范偉興;PRV魯A株的分離鑒定及表達(dá)EGFP和CSFV-E2的TK～-重組偽狂犬病毒的構(gòu)建[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2002年

4 王祥;豬乙型腦炎減毒活疫苗與基因免疫研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 吳加強(qiáng);豬繁殖與呼吸綜合征病毒resp株增殖條件的優(yōu)化及其高免血清與單克隆抗體的研制[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

2 侯俊;HIV p24抗原的表達(dá)、單克隆抗體的制備和初步應(yīng)用[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2002年

3 葛新;肺炎克雷伯菌莢膜糖蛋白的提取純化及其免疫調(diào)節(jié)作用的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2002年

4 馬秀麗;雞傳染性法氏囊病ELISA監(jiān)測方法的標(biāo)準(zhǔn)化研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2002年

5 張建武;雞傳染性支氣管炎血凝抑制（HI）試驗(yàn)的研究和應(yīng)用[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2002年

6 馬新英;森林腦炎病毒的鑒定以及生物學(xué)性狀和核苷酸全序列測定的研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

7 周斌;雞胚致死孤兒病毒的分離鑒定及其Ⅲa蛋白的原核表達(dá)與抗原性分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

8 吳萍;荊杏止咳顆粒治療小兒外感咳嗽的實(shí)驗(yàn)研究[D];湖南中醫(yī)學(xué)院;2003年

9 達(dá)來寶力格;雞傳染性法氏囊病毒檢測方法的建立[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

10 孟祥俊;單純皰疹病毒Ⅰ型糖蛋白B基因疫苗的構(gòu)建及初步免疫學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2004年

本文編號(hào)：1510134