基因工程豬可作為動物模型研究人類疾病,也是異種器官移植最合適的供體.CRISPR/Cas9系統(tǒng)是高效特異的基因編輯工具.因此本文通過顯微注射的方式將sg RNA和Cas9 m RNA注射入單細(xì)胞期的孤雌胚胎中,待其發(fā)育為囊胚后檢測打靶效率.T7EN1酶切和TA克隆測序結(jié)果表明,本研究可以在豬的孤雌胚胎中同時實現(xiàn)3個基因(B2M,CIITA,GGTA1或者LDLR,LEP,LEPR)的高效敲除(敲除率分別為62.5%和50%),為使用CRISPR/Cas9系統(tǒng)高效、快速和經(jīng)濟(jì)地建立多基因修飾的豬模型提供了基礎(chǔ).

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【部分圖文】：

圖1靶位點分布以及pUC57-sgRNA表達(dá)載體示意圖

中國科學(xué):生命科學(xué)2016年第46卷第3期309圖1靶位點分布以及pUC57-sgRNA表達(dá)載體示意圖A:B2M,CIITA,GGTA1和LDLR,LEP,LEPR的部分蛋白編碼區(qū)與Cas9/sgRNAs的靶位點區(qū)域示意圖.灰條框表示外顯子,黑色粗線表示內(nèi)含子;PAM（proto....

圖2CRISPR/Cas9介導(dǎo)的單個囊胚多基因修飾情況

康難難等:利用豬單個胚胎建立高效快速的CRISPR/Cas9打靶位點檢測方法310圖2CRISPR/Cas9介導(dǎo)的單個囊胚多基因修飾情況A:驗證sgRNA-Cas9介導(dǎo)的多基因修飾的效率.左圖為PCR擴(kuò)增免疫排斥相關(guān)基因(B2M,CIITA和GGTA1)與脂代謝相關(guān)基因(LDLR....

圖1靶位點分布以及pUC57-sgRNA表達(dá)載體示意圖

中國科學(xué):生命科學(xué)2016年第46卷第3期309圖1靶位點分布以及pUC57-sgRNA表達(dá)載體示意圖A:B2M,CIITA,GGTA1和LDLR,LEP,LEPR的部分蛋白編碼區(qū)與Cas9/sgRNAs的靶位點區(qū)域示意圖.灰條框表示外顯子,黑色粗線表示內(nèi)含子;PAM（proto....

圖2CRISPR/Cas9介導(dǎo)的單個囊胚多基因修飾情況

康難難等:利用豬單個胚胎建立高效快速的CRISPR/Cas9打靶位點檢測方法310圖2CRISPR/Cas9介導(dǎo)的單個囊胚多基因修飾情況A:驗證sgRNA-Cas9介導(dǎo)的多基因修飾的效率.左圖為PCR擴(kuò)增免疫排斥相關(guān)基因(B2M,CIITA和GGTA1)與脂代謝相關(guān)基因(LDLR....

本文編號：4041356