目的:自在原核生物中發(fā)現(xiàn)線性質(zhì)粒以來,對(duì)于線性質(zhì)粒的探索一度成為原核生物研究的熱點(diǎn),其作為獨(dú)立于染色體基因組外的遺傳單位,在細(xì)菌耐藥性及致病方面發(fā)揮了重要作用。質(zhì)粒p BSSB1是目前為止在傷寒沙門菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)中發(fā)現(xiàn)的唯一的一種線性質(zhì)粒。本課題組對(duì)線性質(zhì)粒p BSSB1其上兩個(gè)基因的功能展開研究,進(jìn)一步探索該線性質(zhì)粒在傷寒沙門菌中所發(fā)揮的作用。方法:1.傷寒沙門菌LP002、LP008基因高表達(dá)菌株、缺陷株及異源表達(dá)菌株的構(gòu)建。構(gòu)建p BAD-LP008重組載體,鑒定正確后,用陽性重組質(zhì)粒和空質(zhì)粒電擊轉(zhuǎn)化傷寒沙門菌野生株(S.Typhi GIFU10007),作為L(zhǎng)P008基因高表達(dá)菌株(WT-LP008)和空質(zhì)粒對(duì)照株(WT-p BAD);陽性質(zhì)粒及空載體電轉(zhuǎn)化S.Typhi Ty2感受態(tài)作為L(zhǎng)P008基因異源表達(dá)株(Ty2-LP008)及異源表達(dá)對(duì)照株(Ty2-p BAD)。LP008及LP002基因缺陷株的制備則是將同源重組片段連接于自殺質(zhì)粒p GMB151,將陽性質(zhì)粒電擊轉(zhuǎn)化入野生株后利用蔗糖平板篩選最終...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫索引
1 緒論
    1.1 傷寒沙門菌簡(jiǎn)介
    1.2 原核生物線性質(zhì)粒的發(fā)現(xiàn)及作用
    1.3 線性質(zhì)粒pBSSB1的研究現(xiàn)狀
    1.4 本論文研究?jī)?nèi)容
2 研究目的、技術(shù)路線、材料方法
    2.1 研究目的
    2.2 技術(shù)路線
        2.2.1 LP008、LP002基因功能的初步預(yù)測(cè)
        2.2.2 LP008基因研究技術(shù)路線
        2.2.3 LP002基因研究技術(shù)路線
    2.3 實(shí)驗(yàn)材料
        2.3.1 菌株和質(zhì)粒
        2.3.2 主要試劑和材料
        2.3.3 主要溶液
        2.3.4 主要儀器
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 傷寒沙門菌LP008、LP002蛋白結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)
        2.4.2 傷寒沙門菌LP008基因相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法
            2.4.2.1 傷寒沙門菌LP008基因相關(guān)菌株的構(gòu)建
            2.4.2.2 LP008基因高表達(dá)菌株的生長(zhǎng)曲線測(cè)定
            2.4.2.3 LP008基因高表達(dá)菌株的動(dòng)力試驗(yàn)
            2.4.2.4 LP008基因高表達(dá)菌株的生物膜試驗(yàn)
            2.4.2.5 LP008基因高表達(dá)菌株的上皮細(xì)胞侵襲試驗(yàn)
            2.4.2.6 LP008基因高表達(dá)菌株的qRT-PCR
            2.4.2.7 LP008重組蛋白的純化及獲取
            2.4.2.8 凝膠阻滯試驗(yàn)
            2.4.2.9 基因芯片
        2.4.3 傷寒沙門菌LP002基因相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法
            2.4.3.1 LP002缺陷變異株的構(gòu)建
            2.4.3.2 LP002缺陷株的生長(zhǎng)曲線測(cè)定
            2.4.3.3 LP002缺陷株的動(dòng)力試驗(yàn)
            2.4.3.4 LP002缺陷株的上皮細(xì)胞侵襲試驗(yàn)
            2.4.3.5 LP002缺陷株的巨噬細(xì)胞胞內(nèi)試驗(yàn)
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 傷寒沙門菌LP008、LP002蛋白結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)
    3.2 傷寒沙門菌LP008基因相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 傷寒沙門菌LP008基因相關(guān)菌株的構(gòu)建
        3.2.2 LP008基因?qū)ιL(zhǎng)情況的影響
        3.2.3 LP008基因高表達(dá)菌株的動(dòng)力試驗(yàn)
        3.2.4 LP008基因高表達(dá)菌株的生物膜試驗(yàn)
        3.2.5 LP008基因高表達(dá)菌株的上皮細(xì)胞侵襲試驗(yàn)
        3.2.6 LP008基因高表達(dá)菌株的qRT-PCR
        3.2.7 LP008重組蛋白的純化及獲取
        3.2.8 凝膠阻滯試驗(yàn)
        3.2.9 基因芯片
    3.3 傷寒沙門菌LP002基因相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 LP002缺陷變異株的構(gòu)建
        3.3.2 LP002基因?qū)ιL(zhǎng)情況的影響
        3.3.3 LP002基因缺陷變異株的動(dòng)力試驗(yàn)
        3.3.4 LP002基因缺陷變異株的上皮細(xì)胞侵襲試驗(yàn)
        3.3.5 LP002基因缺陷變異株的巨噬細(xì)胞胞內(nèi)存活試驗(yàn)
4 討論
    4.1 LP008基因功能
        4.1.1 LP008基因?qū). Typhi動(dòng)力、生物膜、侵襲力的調(diào)節(jié)
        4.1.2 LP008基因調(diào)控機(jī)制
    4.2 LP002基因功能
5 主要結(jié)論及展望
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文及學(xué)術(shù)交流



本文編號(hào)：4041324