發(fā)布時(shí)間：2024-03-25 04:25

　　自然殺傷細(xì)胞(Natural killer cells,NK cells)因其天然的殺傷能力而得名。從1975年的偶然發(fā)現(xiàn)到如今被免疫學(xué)家和臨床醫(yī)生寄予厚望,學(xué)界對(duì)NK細(xì)胞的認(rèn)識(shí)經(jīng)歷了從最早CD56+CD3-簡(jiǎn)單表型描述到鑒定NK細(xì)胞是機(jī)體抗病毒和抗腫瘤的天然淋巴細(xì)胞重要亞群之一的漫長(zhǎng)過程。NK細(xì)胞不僅是宿主防御中的“哨兵”,而且可以通過分泌細(xì)胞因子和趨化因子在維持組織穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。體內(nèi)成熟NK細(xì)胞數(shù)量的異常對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展,甚至是對(duì)自身免疫疾病發(fā)生都有重要影響。但是,目前無(wú)論是NK細(xì)胞功能分子的研究,還是促進(jìn)NK細(xì)胞發(fā)育成熟調(diào)控因子的研究,仍主要局限于IFN-γ和IL-15等少數(shù)細(xì)胞因子。生長(zhǎng)促進(jìn)因子作為一類廣泛表達(dá)且對(duì)于細(xì)胞發(fā)育成熟非常作用的細(xì)胞因子,在NK細(xì)胞的研究中鮮有報(bào)道。同時(shí),NK細(xì)胞功能的研究仍主要集中于外周NK細(xì)胞在宿主防御中的作用,但是關(guān)于組織居留NK(Tissue-Resident NK,trNK)細(xì)胞的組織特異性功能報(bào)道甚少。人外周血中,NK細(xì)胞約占淋巴細(xì)胞總數(shù)的10%。但是在子宮組織中,隨著妊娠反應(yīng)的開始,子宮內(nèi)膜迅速蛻膜化,NK細(xì)胞數(shù)量迅速增加,最高可達(dá)...

【文章頁(yè)數(shù)】：132 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
第一章 緒論NK細(xì)胞發(fā)育和功能的研究進(jìn)展
    1.1 引言
    1.2 NK細(xì)胞的研究簡(jiǎn)史
    1.3 多組學(xué)聯(lián)合分析助力NK細(xì)胞發(fā)育和功能的研究
        1.3.1 基因組學(xué)分析
        1.3.2 轉(zhuǎn)錄組學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)分析
        1.3.3 多組學(xué)聯(lián)合分析
    1.4 NK細(xì)胞表型的多樣性
    1.5 NK細(xì)胞功能的多樣性
        1.5.1 NK細(xì)胞的抗腫瘤、抗病毒功能
        1.5.2 NK細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能
        1.5.3 NK細(xì)胞促進(jìn)胚胎植入的功能
    1.6 NK細(xì)胞的發(fā)育和成熟
        1.6.1 NK細(xì)胞發(fā)育的微環(huán)境
        1.6.2 NK細(xì)胞發(fā)育和成熟的程序化
        1.6.3 細(xì)胞因子促進(jìn)NK細(xì)胞發(fā)育和成熟
        1.6.4 生長(zhǎng)促進(jìn)因子促進(jìn)NK細(xì)胞發(fā)育和成熟
        1.6.5 轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控NK細(xì)胞發(fā)育和成熟
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 臨床標(biāo)本
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 細(xì)菌培養(yǎng)及相關(guān)試劑
        2.1.4 RNA體外轉(zhuǎn)錄質(zhì)粒及相關(guān)試劑
        2.1.5 質(zhì)粒及抽提、轉(zhuǎn)染試劑
        2.1.6 細(xì)胞電核轉(zhuǎn)試劑
        2.1.7 細(xì)胞系及培養(yǎng)基
        2.1.8 細(xì)胞因子及生長(zhǎng)促進(jìn)因子
        2.1.9 抗體
        2.1.10 細(xì)胞分離和純化試劑
        2.1.11 總RNA提取和RT-PCR試劑
        2.1.12 核酸序列
        2.1.13 PCR試劑和核酸電泳試劑
        2.1.14 熒光定量PCR試劑
        2.1.15 SDS-PAGE電泳和Western blotting試劑
        2.1.16 免疫熒光及流式內(nèi)標(biāo)檢測(cè)試劑
        2.1.17 蛋白純化試劑
        2.1.18 NK細(xì)胞ChIP實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.19 熒光素報(bào)告實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.20 DNA-pull down實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 人單個(gè)核細(xì)胞分離及NK細(xì)胞純化
        2.3.2 小鼠組織單個(gè)核細(xì)胞分離
        2.3.3 人NK細(xì)胞純化及基因芯片數(shù)據(jù)分析
        2.3.4 細(xì)胞總RNA提取和RT-PCR
        2.3.5 熒光定量PCR
        2.3.6 流式細(xì)胞術(shù)
        2.3.7 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        2.3.8 細(xì)胞干擾和過表達(dá)實(shí)驗(yàn)
        2.3.9 基因編輯小鼠構(gòu)建
        2.3.10 NK細(xì)胞相關(guān)基因保守性分析
        2.3.11 PBX1蛋白的表達(dá)和純化
        2.3.12 PBX1的抗體制備
        2.3.13 人臍血干細(xì)胞純化及NK細(xì)胞體外分化擴(kuò)增
        2.3.14 細(xì)胞Western blotting
        2.3.15 NK細(xì)胞ChIP-Seq實(shí)驗(yàn)
        2.3.16 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
        2.3.17 DNA-pull down實(shí)驗(yàn)
        2.3.18 骨髓嵌合體小鼠模型
        2.3.19 小鼠骨髓細(xì)胞混合轉(zhuǎn)輸模型
        2.3.20 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 NK細(xì)胞產(chǎn)生生長(zhǎng)促進(jìn)因子促進(jìn)胚胎發(fā)育
    3.1 引言
    3.2 基因芯片差異分析子宮trNK細(xì)胞和外周血NK細(xì)胞
        3.2.1 子宮NK細(xì)胞與外周NK細(xì)胞基因表達(dá)譜存在顯著差異
        3.2.2 子宮CD49a⁺NK細(xì)胞表達(dá)多種生長(zhǎng)促進(jìn)因子
    3.3 子宮NK細(xì)胞分泌生長(zhǎng)促進(jìn)因子PTN和OGN
        3.3.1 子宮CD49a⁺ NK細(xì)胞表達(dá)PTN和OGN等生長(zhǎng)促進(jìn)因子
        3.3.2 子宮CD11b^-CD27^-NK細(xì)胞和trNK細(xì)胞表達(dá)生長(zhǎng)促進(jìn)因子
    3.4 HLA-G誘導(dǎo)NK細(xì)胞分泌生長(zhǎng)促進(jìn)因子
        3.4.1 HLA-G+絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞促進(jìn)NK細(xì)胞分泌生長(zhǎng)促進(jìn)因子
        3.4.2 HLA-G-ILT2-KIR2DL4互作促進(jìn)NK細(xì)胞分泌生長(zhǎng)促進(jìn)因子
    3.5 異常發(fā)育的胚胎HLA-G表達(dá)量顯著降低
    3.6 反復(fù)流產(chǎn)病人NK細(xì)胞分泌生長(zhǎng)促進(jìn)因子能力顯著降低
        3.6.1 反復(fù)流產(chǎn)病人產(chǎn)生生長(zhǎng)促進(jìn)因子的NK細(xì)胞功能亞群顯著減少
        3.6.2 反復(fù)流產(chǎn)病人NK細(xì)胞表達(dá)生長(zhǎng)促進(jìn)因子的能力顯著下降
    3.7 Ptn^-/-Ogn^-/-Spp1^-/-小鼠胚胎發(fā)育受限
        3.7.1 Ptn^-/-Ogn^-/-Spp1^-/-小鼠構(gòu)建及驗(yàn)證
        3.7.2 Ptn^-/-Ogn^-/-Spp1^-/-小鼠胚胎發(fā)育受限
    3.8 討論與總結(jié)
第四章 PBX1促進(jìn)NK細(xì)胞在骨髓中的發(fā)育成熟
    4.1 引言
    4.2 生長(zhǎng)促進(jìn)因子支持NK細(xì)胞成熟
        4.2.1 NK細(xì)胞發(fā)育過程中表達(dá)生長(zhǎng)促進(jìn)因子
        4.2.2 Ptn^-/-Ogn^-/-小鼠模型證明生長(zhǎng)促進(jìn)因子促進(jìn)NK細(xì)胞在骨髓成熟
        4.2.3 骨髓混合轉(zhuǎn)輸模型證明PTN和OGN促進(jìn)NK細(xì)胞在骨髓成熟
        4.2.4 骨髓成熟NK細(xì)胞表達(dá)生長(zhǎng)促進(jìn)因子受體RPTP-β
    4.3 PBX1是NK細(xì)胞一個(gè)高度保守的轉(zhuǎn)錄因子
        4.3.1 PBX1在物種進(jìn)化過程中高度保守
        4.3.2 PBX1在人骨髓NK細(xì)胞中高表達(dá)
        4.3.3 PBX1在骨髓CD11b⁺單陽(yáng)性NK細(xì)胞中高表達(dá)
    4.4 PBX1促進(jìn)NK細(xì)胞表達(dá)PTN和OGN
        4.4.1 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)PTN和OGN是PBX1的靶基因
        4.4.2 在NK細(xì)胞中干擾PBX1表達(dá)抑制PTN和OGN表達(dá)
        4.4.3 在NK細(xì)胞分化體系中過表達(dá)PBX1促進(jìn)PTN和OGN表達(dá)
    4.5 PBX1直接結(jié)合PTN和OGN啟動(dòng)子促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄
        4.5.1 CHIP-seq結(jié)果證明在PTN和OGN啟動(dòng)子區(qū)有PBX1結(jié)合峰
        4.5.2 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證PBX1結(jié)合PTN和OGN啟動(dòng)子區(qū)
        4.5.3 DNA-pulldown驗(yàn)證PBX1結(jié)合PTN和OGN啟動(dòng)子中特異性序列
    4.6 Pbx1缺陷小鼠NK細(xì)胞數(shù)量嚴(yán)重減少
        4.6.1 骨髓嵌合體小鼠模型證明Pbx1促進(jìn)NK細(xì)胞發(fā)育
        4.6.2 Pbx1條件型敲除小鼠模型證明Pbx1促進(jìn)NK細(xì)胞發(fā)育
    4.7 PBX1促進(jìn)NK細(xì)胞在骨髓的成熟
        4.7.1 Pbx1條件型敲除小鼠模型證明PBX1促進(jìn)NK細(xì)胞成熟
        4.7.2 PTN/OGN恢復(fù)實(shí)驗(yàn)證明PBX1-PTN/OGN軸促進(jìn)NK細(xì)胞成熟
    4.8 PBX1-PTN/OGN軸通過上調(diào)T-bet表達(dá)促進(jìn)NK細(xì)胞成熟
        4.8.1 PBX1-PTN/OGN軸促進(jìn)骨髓NK細(xì)胞的增殖和遷出骨髓能力
        4.8.2 PBX1-PTN/OGN軸上調(diào)骨髓NK細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子T-bet的表達(dá)
    4.9 討論與總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間的主要研究成果
附錄



本文編號(hào)：3938536