目的探究白細(xì)胞介素10(interleutin 10,IL-10)基因修飾的兔脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)對(duì)自體外周血Th17細(xì)胞的免疫調(diào)控作用。方法構(gòu)建IL-10基因修飾的兔脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(interleukin-10 gene-modified adipose mesenchymal stem cells,IL-10-ADSCs)及熒光蛋白標(biāo)記的兔脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(green fluorescent protein-adipose mesenchymal stem cells,GFP-ADSCs),定量即時(shí)聚合酶鏈鎖反應(yīng)(quantitative real time polymerase chain reaction,Q-PCR)及Western blot檢測(cè)細(xì)胞IL-10基因及蛋白表達(dá)水平。分離培養(yǎng)兔淚腺上皮細(xì)胞及自體外周血淋巴細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)建立淋巴細(xì)胞體外激活共培養(yǎng)體系,分組按PBMCsADSCs為51的比例加入等量ADSCs、...

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圖1IL-10重組慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定。

兔IL-10目的基因經(jīng)PCR擴(kuò)增后產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析,基因片段大小為534bp,大小與預(yù)期結(jié)果相符,見圖1A。挑取細(xì)菌培養(yǎng)皿單克隆菌落,過(guò)夜搖菌后進(jìn)行菌液PCR鑒定,陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子PCR產(chǎn)物大小約為900bp(PCR擴(kuò)增用的是載體上的一段通用引物,故應(yīng)該比534bp大30....

圖2pHBLV-IL-10載體測(cè)序結(jié)果。

圖1IL-10重組慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定。2.1.2慢病毒包裝與滴度檢測(cè)

圖3IL-10重組慢病毒包裝48h(A)及72h(B)GFP表達(dá)情況(×4)。

用濃縮后的慢病毒顆粒感染ADSCs,48h熒光顯微鏡下觀察GFP表達(dá)效率約為80%以上,見圖5A。應(yīng)用Q-PCR對(duì)IL-10-ADSCs組及GFP-ADSCs組細(xì)胞中IL-10mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,與GFP-ADSCs組相比,IL-10-ADSCs組IL-10....

圖4梯度稀釋病毒計(jì)算病毒滴度(×20)。

圖3IL-10重組慢病毒包裝48h(A)及72h(B)GFP表達(dá)情況(×4)。圖5IL-10-ADSCs的構(gòu)建與鑒定。

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