目的:探討不同厚度莢膜的鮑曼不動(dòng)桿菌誘導(dǎo)鼠Raw 264. 7巨噬細(xì)胞自噬和凋亡的能力及潛在的機(jī)制。方法:從肺炎患者痰液中分離鑒定鮑曼不動(dòng)桿菌,以剛果紅染色法染色細(xì)菌莢膜并篩選莢膜厚度顯著不同的菌株用于后續(xù)研究。分別以厚莢膜株(Ab-H株)和薄莢膜株(Ab-B株)感染Raw 264. 7細(xì)胞,于感染后1 h、3 h和6 h時(shí)收集細(xì)胞,采用免疫印跡法檢測細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC-3和Beclin-1表達(dá),以及PI3K、Akt和mTOR磷酸化水平,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞活性氧生成量和凋亡率。結(jié)果:鮑曼不動(dòng)桿菌經(jīng)剛果紅染色后,菌體染成紫黑色,背景染成紅色,莢膜不著色,可以清晰地觀察到細(xì)菌莢膜厚度。篩選出兩株莢膜厚度差異顯著的鮑曼不動(dòng)桿菌,分別為AbH株和Ab-B株。上述菌株感染Raw 264. 7細(xì)胞后均可以誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡,并增加細(xì)胞活性氧生成量,PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平受到顯著抑制,且抑制作用隨著時(shí)間延長而增加(P <0. 05)。Ab-H株細(xì)胞凋亡率、自噬相關(guān)蛋白Becline-1表達(dá)量和活性氧生成量顯著高于Ab-B株(P <0. 05)。結(jié)論:鮑曼不動(dòng)桿菌能夠...

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【部分圖文】：

圖5各組Raw264.7細(xì)胞PI3K、Akt和mTOR蛋白磷酸化水平檢測

圖4各組Raw264.7細(xì)胞活性氧生成量比較(DCFH-DA熒光探針法)3討論

圖4各組Raw264.7細(xì)胞活性氧生成量比較(DCFH-DA熒光探針法)

兩株不同莢膜厚度鮑曼不動(dòng)桿菌感染Raw264.7細(xì)胞后，細(xì)胞PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平顯著受到抑制，且抑制作用隨著時(shí)間延長而增強(qiáng)(P<0.05)。以Ab-H株作用Raw264.7細(xì)胞1h和3h時(shí)，細(xì)胞PI3K磷酸化水平顯著低于Ab-B株作用(1h,t=3.2....

圖3各組Raw264.7細(xì)胞凋亡率比較(AnnexinV-FITC/PI法)

圖2各組Raw264.7細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC3和Beclin-1表達(dá)比較2.3不同莢膜厚度鮑曼不動(dòng)桿菌誘導(dǎo)Raw264.7細(xì)胞活性氧生成增加

圖2各組Raw264.7細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC3和Beclin-1表達(dá)比較

Ab-H株和Ab-B株均可誘導(dǎo)Raw264.7細(xì)胞不同程度的自噬和凋亡(圖2和圖3)。Raw264.7細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC-3Ⅱ在感染后1h時(shí)未被檢出，但隨感染時(shí)間延長其表達(dá)量在各組細(xì)胞均增加。感染后3h和6h時(shí)，Ab-B組和Ab-H組細(xì)胞LC-3Ⅱ表達(dá)量顯著高于對照組....

本文編號(hào)：3921267