目的：探討miR-195調(diào)控LATS2對BEL-7402/5-FU細胞凋亡的影響及其作用機制。方法：MicroRNA（miRNA）芯片分析BEL-7402和BEL-7402/5-FU細胞miRNA的表達差異，靶基因預測軟件分析與LATS2基因相互作用的miRNA，篩選出miR-195為目的miRNA。將miR-195質(zhì)粒載體及其陰性對照質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染至BEL-7402/5-FU細胞；熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞CmiR-195調(diào)控的靶基因；倒置熒光顯微鏡和實時定量RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染效率；MTT檢測細胞增殖情況，流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率；實時定量RT-PCR檢測mRNA水平，Western blot檢測蛋白表達水平。結(jié)果：基因芯片檢測結(jié)果表明下調(diào)兩倍的miRNA有：miR-195，miR-18a，miR-122等，BEL-7402/5-FU比BEL-7402上調(diào)兩倍的miRNA有：miR-18和miR-224；結(jié)合芯片結(jié)果及利用生物信息學篩選出miR-195作為研究對象；倒置熒光顯微鏡和實時定量RT-PCR檢測，結(jié)果表明在miR-195轉(zhuǎn)染的BEL-7402/5-FU細胞中miR-195表達水... 

【文章來源】：南華大學湖南省

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

MicroRNA芯片分析BEL-7402和BEL-7402/5-FU細胞中miRNA表達情況

圖 1 MicroRNA 芯片分析 BEL-7402 和 BEL-7402/5-FU 細胞中 miRNA 表達情況*P<0.05 vs.BEL-7402/5-FU，Mean±SD，n=3二、生物信息學篩選目的 miRNA 并預測靶基因結(jié)合文獻及 microRNA 芯片結(jié)果篩選目的 miRNA，通過 Microrna.org 和 Targetscan生物信息學軟件預測靶基因。選取 miR-195 作為目的 miRNA 進行研究。（圖 2）。

三、倒置熒光顯微鏡和實時定量 RT-PCR 檢測 miR-195 轉(zhuǎn)染情況質(zhì)粒表達載體測序結(jié)果顯示 miR-195 序列位于載體 122-140bp 間，說明載體構(gòu)建成功（圖 3）。miR-195 轉(zhuǎn)染 BEL-7402/5-FU 細胞后 48 小時，通過倒置熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染細胞的熒光情況，各轉(zhuǎn)染組的轉(zhuǎn)染率均大于 35%（圖 4）。實時定量 RT-PCR檢測結(jié)果顯示，miR-195 轉(zhuǎn)染組較未轉(zhuǎn)染組及陰性對照組的 miR-195 的表達明顯上調(diào)（圖 5）。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2900423