發(fā)布時間：2020-12-04 12:24

　　該課題探討了3D懸滴培養(yǎng)與貼壁培養(yǎng)體外誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUC-MSCs）在成軟骨分化特性上的差異。采用機械勻漿法和組織塊貼壁培養(yǎng)法體外分離培養(yǎng)獲得第5代h UC-MSCs,流式細胞術檢測干細胞表面免疫標記物,經(jīng)3D懸滴培養(yǎng)與貼壁培養(yǎng)誘導應用番紅O和阿利辛藍染色及熒光定量檢測富含透明質(zhì)酸糖胺聚糖的細胞外基質(zhì)形成情況以及不同時間點（3天、7天、14天）成軟骨相關基因ACAN、MIA、COL1A2、COL2A1和COL10A1表達,并用免疫組化染色的方法檢測II型膠原的表達情況。結(jié)果顯示,流式細胞術檢測的第5代h UC-MSCs間充質(zhì)干細胞表面標記物結(jié)果符合國際細胞療法協(xié)會制定的鑒定標準; 3D懸滴培養(yǎng)的h UC-MSCs可形成致密的細胞聚合物,貼壁培養(yǎng)的細胞形態(tài)成長梭形;番紅O和阿利辛藍染色結(jié)果顯示, 3D懸滴培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的h UC-MSCs均能形成軟骨細胞;但熒光實時定量PCR結(jié)果顯示, 3D懸滴培養(yǎng)的h UC-MSCs形成軟骨細胞的成軟骨相關基因的表達明顯多于貼壁培養(yǎng)細胞形成軟骨細胞的成... 

【文章來源】：中國細胞生物學學報. 2019年10期 第1967-1975頁

【文章頁數(shù)】：9 頁

【圖文】：

第5代人臍帶間充質(zhì)干細胞的表面標記表達

hUC-MSCs細胞微球的形成和形態(tài)

3D懸滴培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的第5代hUC-MSCs28天成軟骨誘導后進行II型膠原免疫組化染色分析:對照組細胞質(zhì)和細胞膜呈淡黃色,為弱陽性著色(圖4A和圖4D),成軟骨細胞誘導組hUC-MSCs組細胞質(zhì)和細胞膜呈棕黃色,為強陽性著色(圖4B和圖4E);3D懸滴培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的細胞隨機選取5個透明、非重疊樣本區(qū)域,用Image-Pro Plus分析系統(tǒng)對II型膠原免疫組化染色陽性結(jié)果進行統(tǒng)計分析,結(jié)果顯示,3D懸滴培養(yǎng)的誘導的第5代hUC-MSCs成軟骨能力更強(圖4C和圖4F)。兩組間比較用獨立樣本t檢驗。以P<0.05為有統(tǒng)計學差異。圖4 3D懸滴培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)hUC-MSCs誘導28天成軟骨II型膠原免疫組化染色結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]長期傳代培養(yǎng)對人臍帶間充質(zhì)干細胞生物學特性的影響[J]. 張權,張亞奇,饒巍,周端鵬,韓兵,武棟成.  中國細胞生物學學報. 2019(01)
[2]人間充質(zhì)干細胞體外成軟骨分化能力綜合評價策略研究[J]. 張可華,劉靜,納濤,袁寶珠.  中國新藥雜志. 2017(18)



本文編號：2897603