發(fā)布時間：2020-11-18 16:49

　　 [目的]研究與白假絲念珠菌毒力相關(guān)的RAPD電泳條帶的基因信息,明確這些條帶是否來源于已知的毒力調(diào)控基因。[方法]通過對相關(guān)的白假絲酵母菌重新進行RAPD-PCR,切膠回收,以回收的DNA作為模板進行大量擴增,構(gòu)建TA克隆,送測序。將獲得的DNA信息登錄Gen Bank數(shù)據(jù)庫進行比對,尋找與包含這些條帶信息的蛋白質(zhì)。查閱文獻,進行生物信息學分析,明確條帶的基因信息與已發(fā)現(xiàn)的白假絲酵母菌調(diào)控基因之間的關(guān)系。[結(jié)果]白假絲酵母菌RAPD的450 bp條帶為Abp1p(ABP1)蛋白的基因片段。[結(jié)論]Abp1p(ABP1)基因的過表達可能與下調(diào)磷脂酶表達有關(guān),但具體機制有待進一步研究。
【部分圖文】：

采用隨機引物P2對5株菌株進行RAPD擴增。根據(jù)前期研究結(jié)果，450 bp與磷脂酶、蛋白酶具有較高的相關(guān)性。該試驗中，菌株1、菌株5中擴增出450 bp條帶。2.2 切膠回收

經(jīng)切膠回收的450 bp DNA與T載體連接后，經(jīng)轉(zhuǎn)化、涂板，挑取白色菌落，進行菌落PCR鑒定。其中菌株5的5-3、5-4為陽性菌落。挑取菌落5-3、5-4，經(jīng)搖菌后送測序。2.4 測序結(jié)果

將上述結(jié)果在NCBI網(wǎng)站上使用Blast功能(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)進行比對。該結(jié)果與白假絲酵母菌SC5314的Abp1p(ABP1)蛋白編碼基因相似度最高(98%)，見圖5。因此，可以確定，該基因為白假絲酵母菌ABP1的編碼基因。圖5 測序比對結(jié)果圖
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