發(fā)布時間：2020-11-14 02:53

　　 目的:明確Nischarin在腦老化時的表達變化,闡明nischarin的表達改變對樹突棘可塑性的影響,探討影響nischarin表達的可能機制。方法:利用Western blot技術(shù)分別檢測nischarin在不同年齡大鼠與小鼠的大腦皮層與海馬中表達的變化,以及體外不同發(fā)育程度的大鼠海馬神經(jīng)元與小鼠海馬神經(jīng)元中表達的變化。免疫熒光技術(shù)分別分析nischarin蛋白在不同年齡大鼠腦片中的蛋白表達與定位,以及在體外培養(yǎng)不同時間的大鼠海馬神經(jīng)元中的表達與定位。構(gòu)建能有效敲減nischarin的shRNA質(zhì)粒;在原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元中轉(zhuǎn)染shRNA質(zhì)粒敲減nischarin蛋白后,觀察樹突棘密度及形態(tài)的變化。在原代培養(yǎng)神經(jīng)元中分別孵育LPS、IL-1β與IL-6,利用western blot技術(shù)檢測nischarin蛋白的表達變化。結(jié)果:Nischarin的表達在大鼠與小鼠的大腦皮層及海馬中均隨年齡逐漸增加,在2年齡的大鼠中表達最高,其中在海馬的表達較16周齡的成年大鼠也有顯著增強。Nischarin在體外培養(yǎng)的大鼠與小鼠海馬神經(jīng)元中的表達隨培養(yǎng)時間而增加,在培養(yǎng)20天的老化神經(jīng)元中顯著高于13天的神經(jīng)元。在腦片中nischarin熒光強度隨年齡增強,在原代海馬神經(jīng)元中nischarin熒光強度隨發(fā)育增強。構(gòu)建的Nischarin-shRNA質(zhì)粒能有效地敲減nischarin蛋白的表達水平,經(jīng)轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元后,發(fā)現(xiàn)椎體神經(jīng)元的樹突棘密度顯著地高于對照shRNA組的神經(jīng)元,且以瘦長型的樹突棘密度增加明顯,而蕈狀和短粗型樹突棘無明顯改變。LPS、IL-1β和IL-6分別孵育海馬神經(jīng)元后,nischarin的表達較PBS對照組明顯增高,差異顯著。結(jié)論:Nischarin在老年鼠海馬中的表達顯著增強,抑制nischarin的表達能增加海馬椎體神經(jīng)元樹突上的瘦長型樹突棘密度,LPS與一些細胞因子能促進nishcarin蛋白表達。推測Nischarin可能參與了腦老化時學(xué)習(xí)功能的衰退。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R338
【部分圖文】：

ｎｉｓｃｈａｒｉｎ在大鼠大腦皮層與海馬中的表達在出生Ｂ（１?ｄａｙ）是最低的，且其表達??水平在發(fā)育階段（７?ｄａｙｓ，?３?ｗｅｅｋｓ，?１６?ｗｅｅｋｓ）隨年齡持續(xù)增長。年齡為２年的大鼠可??視為老年，圖３．１?Ｂ，老年大鼠（２?ｙｅａｒｓ）海馬中的ｎｉｓｃｈａｒｉｎ水平較成年同類有顯著??增長。說明ｎｉｓｃｈａｒｉｎ在腦老化時表迖增強。??Ａ??Ｉ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ??ｗ??Ｅ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ?４ＭＨ?ｍｍ??｜?丨Ｉ＂?＿丨曬?丨丨丨??Ｂ??３?５?＼ｃ＾ｙ／／Ａ?ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ?＃??＊?Ｉ?Ｉ?ｃｏｒｔｅｘ?＊??３．０?－?＂??Ｉ?２５：?■??ＩＩ?？?丨Ｔ?＿丄??ｏ．＾?１．５－?￣￣??運！?？?ＸｒＳ霧??ＴＯ?Ｓ?１．０－?Ｔ?Ｔ??１?－：?Ｔ?ｒ１！?Ｉ?Ｉ?ｉ??｜國?Ｉ??１?ｄａｙ?７?ｄａｙｓ?３?ｗｅｅｋｓ?１６?ｗｅｅｋｓ?２?ｙｅａｒｓ??１６??

ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｓ?ｔｈｅ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｉｎ?ａｌｌ?ｇｒｏｕｐｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ａｇｅｓ?ｉｎ?ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ?ａｎｄ?ｃｏｒｔｅｘ．??Ｎｉｓｃｈａｒｉｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｗｅｒｅ?ｓｈｏｗｅｄ?ｂｙ?ｒａｔｉｏｓ?ｏｆ?ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ?ｏｐｔｉｃａｌ?ｄｅｎｓｉｔｙ?（ＩＯＤ）?ｏｆ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ??ａｎｄ?ａｃｔｉｎ?（ＩＯＤＮｉｓ／ＩＯＤＡｃｔｉｎ）．?Ｄａｔａ?ａｒｅ?ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｍｅａｎ?ｗｉｔｈ?ＳＤ．?Ｏｎｅ－ｗａｙ?ＡＮＯＶＡ．?＊，??ｐ?＜?０．０５：?ｖｓ．?１?ｄａｙ，?＃，ｐ?＜?０．０５：?ｖｓ．?１６?ｗｅｅｋｓ，?ｎ＝３．??３．２?Ｎｉｓｃｈａｒｉｎ在體外培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元中的表達隨發(fā)育逐漸增強??為了進一步驗彳王ｎｉｓｃｈａｒｉｎ參與腦老化進程，我們又用ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ技術(shù)檢測體??外培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元中ｎｉｓｃｈａｒｉｎ的表迗。圖３．２中，體外培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)??元中ｎｉｓｃｈａｒｉｎ的表達隨培養(yǎng)時間而增長。體外培養(yǎng)２０天的神經(jīng)元可視為老化神經(jīng)??元（２０?ｄａｙｓ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ，?２０?ＤＩＶ）?［２９，３Ｇ］，其?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ?的表達較成熟神經(jīng)元（１３?ＤＩＶ）??及尚未成熟的神經(jīng)元（６ＤＩＶ）有顯著增長；而成熟神經(jīng)元（１３?ＤＩＶ）中ｎｉｓｃｈａｒｉｎ??的表達較尚未成熟的神經(jīng)元（６?ＤＩＶ）也有顯著增長。這進一步說明ｎｉｓｃｈａｒｉｎ在腦??老化時表達增強。??

Ｆｉｇ．３．７．?Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ?ｓｐｉｎｅ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ｉｎ?ｎｅｕｒｏｎｓ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｓｈＲＮＡ??Ａ．?ＧＦＰ?ｏｆ?ｎｅｕｒｏｎｓ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ－ｓｈＲＮＡ?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ－ｓｈＲＮＡ．?Ｂ．?Ｄｅｎｄｒｉｔｉｓｐｉｎｅｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｎｅｕｒｏｎ?ｉｎ?ｆｉｇｕｒｅ?Ａ．?Ｃ．?Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ?ｓｐｉｎｅ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ｗａｓ?ｑｕａｎｔｉｆｉｅｄ?ｗｉｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｙｐｅｓ，?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｃｏｌｕｍｎ?ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｓ?ｔｈｅ?ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ?ｓｐｉｎｅ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ｏｆ?ｔｈｉｎ?ｓｐｉｎｅ?ａｎｔｏｔａｌ?ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ?ｓｐｉｎｅ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ａｒｅ?ｈｉｇｈｅｒ?ｉｎ?ｎｅｕｒｏｎｓ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｎｉｓｃｈａｒｉｎ－ｓｈＲＮｔｈａｎ?ｗｉｔｈ?ｃｏｎｔｒｏｌ－ｓｈＲＮＡ．?Ｄａｔａ?ａｒｅ?ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｍｅａｎ?ｗｉｔｈ?ＳＤ．?ｐ?＜?０．０１：?ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ－ｓｈＲＮＡ，?ｎ＝２０．??３．８?ＬＰＳ與細胞因子促進海馬神經(jīng)元中ｎｉｓｃｈａｒｉｎ的表達??２５??
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Yue-min Ding;Yu-ying Li;Chu Wang;Hao Huang;Chen-chen Zheng;Shao-han Huang;Yang Xuan;Xiao-yi Sun;Xiong Zhang;;Nischarin-siRNA delivered by polyethyleniminealginate nanoparticles accelerates motor function recovery after spinal cord injury[J];Neural Regeneration Research;2017年10期

2 王彥永;耿媛;王培芝;王銘維;;常態(tài)腦老化認知功能障礙及相關(guān)代謝機制研究進展[J];醫(yī)學(xué)與哲學(xué)(B);2014年04期

本文編號：2882984