發(fā)布時間：2020-11-13 01:58

　　 臂旁外側(cè)核(lateral parabrachial nucleus,LPB)是皮膚溫度信號上傳通路的重要中繼站,參與了前饋體溫調(diào)節(jié)過程。我們前期實驗證實,大鼠LPB中分布有對局部腦溫變化敏感的熱敏和冷敏神經(jīng)元,但這些溫度敏感神經(jīng)元的溫敏形成機(jī)制尚不清楚。故本課題擬采用紅外可視腦片膜片鉗等技術(shù),觀察突觸阻斷對LPB神經(jīng)元放電活動和溫度敏感性的影響,LPB溫度敏感神經(jīng)元的電生理特性,以及溫度對A型鉀通道介導(dǎo)的IA電流和HCN通道介導(dǎo)的Ih電流的影響,以揭示LPB神經(jīng)元溫敏特性的形成機(jī)制,為不同環(huán)境溫度下保持體溫穩(wěn)定的中樞調(diào)節(jié)機(jī)制提供一個新思路。第一部分突觸阻斷對大鼠LPB神經(jīng)元放電活動和溫度敏感性的影響目的探討LPB神經(jīng)元溫度敏感性是否為突觸傳遞形成。方法實驗采用健康的SPF級雄性SD大鼠(60~100g),使用紅外可視腦片膜片鉗胞外記錄技術(shù),在鑒別神經(jīng)元的溫度敏感性后,灌流低鈣高鎂ACSF液,觀察突觸阻斷對LPB神經(jīng)元放電活動和溫度敏感性的影響,最后洗脫,觀察LPB神經(jīng)元放電活動與溫度敏感性的恢復(fù)情況。結(jié)果熱敏神經(jīng)元的放電活動與溫度敏感性在突觸阻斷前后無明顯變化(n=13,P0.05);中斜率(n=11)與低斜率(n=11)溫度不敏的神經(jīng)元的放電頻率在突觸阻斷后呈多樣性改變,無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),放電幅度無明顯變化(P0.05),溫度敏感系數(shù)大部分明顯增加(P0.05)。部分熱敏神經(jīng)元與溫度不敏感神經(jīng)元在洗脫后,放電活動及溫度敏感性均可恢復(fù)。結(jié)論LPB熱敏神經(jīng)元的溫度敏感性是其內(nèi)在特性。第二部分LPB溫度敏感神經(jīng)元的電生理特性目的觀察溫度對LPB溫度敏感神經(jīng)元電生理特性的影響,在細(xì)胞水平分析LPB溫度敏感神經(jīng)元的溫敏形成機(jī)制。方法采用紅外可視腦片膜片鉗全細(xì)胞電流鉗技術(shù),觀察溫度對不同類型LPB神經(jīng)元靜息電位、動作電位時程、幅度、閾電位、超極化后電位幅度和前電位上升速率的影響,分析LPB溫度敏感神經(jīng)元的溫敏形成機(jī)制。結(jié)果此部分實驗在LPB區(qū)域共記錄到了75個胞內(nèi)自發(fā)放電神經(jīng)元,包括23個熱敏神經(jīng)元,8個冷敏神經(jīng)元,26個中斜率溫度不敏感神經(jīng)元,18個低斜率溫度不敏感神經(jīng)元。升溫引起LPB熱敏神經(jīng)元前電位上升速率加快(P0.05),放電頻率隨之加快,而對其靜息電位無明顯影響;升溫引起LPB冷敏神經(jīng)元靜息電位發(fā)生超極化改變(P0.05),而對其前電位上升速率無明顯影響;溫度升高使LPB神經(jīng)元動作電位幅度降低和時程縮短(P0.01),但四類神經(jīng)元的動作電位幅度、時程的變化無明顯差異(P0.05);溫度對LPB四類神經(jīng)元的閾電位、超極化后電位幅度均無明顯影響(P0.05)。結(jié)論1.LPB熱敏神經(jīng)元的溫度敏感性與前電位上升速率的溫度依賴性變化有關(guān)。2.LPB冷敏神經(jīng)元的溫度敏感性與膜電位的溫度依賴性變化有關(guān)。第三部分LPB神經(jīng)元溫度敏感性形成的離子機(jī)制目的觀察HCN2通道在LPB神經(jīng)元上的表達(dá)以及溫度對LPB神經(jīng)元IA電流(A型鉀通道介導(dǎo))和Ih電流(HCN通道介導(dǎo))的影響,分析LPB溫度敏感神經(jīng)元溫敏形成的離子機(jī)制。方法采用免疫熒光染色技術(shù)檢測HCN2通道在LPB神經(jīng)元上的表達(dá)。采用腦片膜片鉗全細(xì)胞電壓鉗技術(shù),觀察溫度對不同類型LPB神經(jīng)元IA和Ih電流幅度,失活或激活時間常數(shù)和速率的影響,分析LPB溫度敏感神經(jīng)元溫敏形成的離子機(jī)制。結(jié)果免疫熒光實驗證明,HCN2通道在參與體溫調(diào)節(jié)的三個亞核(LPBc、LPBd、LPBel)均有表達(dá)。膜片鉗實驗共記錄到了18個LPB神經(jīng)元在32℃、36℃、39℃時的IA電流活動。其中,熱敏神經(jīng)元6個,中斜率溫度不敏感神經(jīng)元5個,低斜率溫度不敏感神經(jīng)元7個。另外,在記錄的6個冷敏神經(jīng)元中,均未發(fā)現(xiàn)IA電流。升溫引起LPB神經(jīng)元IA電流幅度增加,但僅熱敏神經(jīng)元在膜電位為+40m V時有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);升溫引起LPB熱敏神經(jīng)元IA電流的失活時間常數(shù)縮短(P0.05),失活速率加快(P0.05);溫度對溫度不敏感神經(jīng)元的IA電流的失活時間常數(shù)與失活速率均無明顯影響(P0.05)。此部分實驗共記錄到了29個LPB神經(jīng)元在32℃、36℃、39℃時的Ih電流活動。其中,熱敏神經(jīng)元7個,中斜率溫度不敏感神經(jīng)元8個,低斜率溫度不敏感神經(jīng)元9個,冷敏神經(jīng)元5個。升溫引起LPB神經(jīng)元Ih電流幅度增加,但僅熱敏神經(jīng)元在膜電位為-120m V時有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);升溫引起LPB熱敏神經(jīng)元Ih電流的激活時間常數(shù)縮短(P0.05),激活速率加快(P0.05);溫度對其他三類神經(jīng)元的Ih電流的激活時間常數(shù)與激活速率均無明顯影響(P0.05)。結(jié)論1.HCN2通道在正常大鼠LPB的三個亞核(LPBc、LPBd、LPBel)中均有表達(dá)。2.LPB熱敏神經(jīng)元溫度敏感性形成的離子機(jī)制與IA電流(A型鉀通道介導(dǎo))的溫度依賴性失活有關(guān)。3.LPB熱敏神經(jīng)元溫度敏感性形成的離子機(jī)制與Ih電流(HCN通道介導(dǎo))的溫度依賴性激活有關(guān)。
【學(xué)位單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R338
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 突觸阻斷對大鼠LPB神經(jīng)元放電活動和溫度敏感性的影響
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實驗儀器
        2.2 實驗動物
        2.3 實驗試劑
        2.4 溶液配制
        2.5 實驗方法
        2.6 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 突觸阻斷對LPB熱敏神經(jīng)元放電活動的影響
        3.2 突觸阻斷對LPB神經(jīng)元溫度敏感性的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 LPB溫度敏感神經(jīng)元的電生理特性
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實驗儀器
        2.2 實驗動物
        2.3 實驗試劑
        2.4 溶液配制
        2.5 實驗方法
        2.6 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 實驗結(jié)果
        3.1 溫度對LPB神經(jīng)元放電頻率的影響
        3.2 溫度對LPB神經(jīng)元膜電位的影響
        3.3 溫度對LPB神經(jīng)元動作電位幅度和時程的影響
        3.4 溫度對LPB神經(jīng)元閾電位的影響
        3.5 溫度對LPB神經(jīng)元AHP幅度的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 LPB神經(jīng)元溫度敏感性形成的離子機(jī)制
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 免疫熒光實驗材料與方法
        2.2 紅外可視腦片膜片鉗電生理材料與方法
    3 結(jié)果
        3.1 免疫熒光染色結(jié)果
        3.2 紅外可視腦片膜片鉗實驗結(jié)果
    4 討論
    5 結(jié)論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝

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本文編號：2881562