發(fā)布時間：2020-11-12 16:14

　　 目的:利用iTRAQ聯(lián)合LC-MS-MS技術(shù)和IPA生物信息平臺尋找復(fù)合冷應(yīng)激ED大鼠陰莖組織中特異性蛋白標志物以及藥物干預(yù)靶點蛋白,并探討該病的發(fā)生發(fā)展的分子機制。方法:取80只性功能正常的雄性大鼠造模,建立復(fù)合應(yīng)激大鼠模型,篩選ED大鼠后,分為正常組(N)(n=10)、ED組(n=15)和伊木薩克片干預(yù)組(伊木薩克組)(n=15)共3組,取陰莖組織,提取蛋白質(zhì),進行iTRAQ標記結(jié)合LC-MS-MS蛋白質(zhì)組學(xué)篩查與鑒定,應(yīng)用IPA分析平臺對大鼠陰莖組織差異蛋白進行生物信息學(xué)分析。結(jié)果:ED組中獲得48種差異表達蛋白,伊木薩克組獲得29種差異表達蛋白。IPA分析ED組差異表達蛋白質(zhì)中與血管內(nèi)皮功能相關(guān)蛋白質(zhì)18種;與平滑肌活動相關(guān)蛋白質(zhì)5種;與炎癥相關(guān)蛋白質(zhì)4種;參與的生物學(xué)過程主要集中在糖代謝和酒精分解代謝等;涉及的通路主要是糖代謝通路、鈣信號通路和RXR激活通路等。伊木薩克組差異表達蛋白質(zhì)中與血管內(nèi)皮功能相關(guān)蛋白質(zhì)5種;與平滑肌活動相關(guān)蛋白質(zhì)1種;與炎癥相關(guān)蛋白質(zhì)4種;參與的生物學(xué)過程主要為糖代謝、血管擴張和急性期反應(yīng)等;涉及的信號通路為糖代謝通路、RXR激活通路和急性期反應(yīng)信號通路等。ED組和伊木薩克組差異蛋白中共獲得與ED疾病相關(guān)的標志物7種:膠原α-1(III)鏈(COL3α1)、膠原α-1(I)鏈(COL1α1)、膠原α-2(I)鏈(COL1α2)、T-激肽原-1(MAP1)、甘油醛-3磷酸脫氫酶(GAPDH)、雙鏈蛋白聚糖(BGN)以及肌球蛋白-11(MYH11)。結(jié)論:陰莖組織中血管內(nèi)皮及平滑肌功能改變可能是復(fù)合應(yīng)激性ED發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵機制,并與炎癥相關(guān);獲得的差異蛋白通過相互作用以及參與相關(guān)的信號通路影響陰莖的正常勃起,上述7種蛋白可作為復(fù)合應(yīng)激ED大鼠陰莖組織標志物,MAP1、GAPDH、BGN和MYH11蛋白可能可以作為伊木薩克片藥物干預(yù)的靶點蛋白。
【部分圖文】：

結(jié)果顯示,ED組差異表達的蛋白質(zhì),經(jīng)IPA疾病標志物分析模塊分析,其中T-激肽原1(MAP1)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)、膠原α-1(Ⅲ)鏈(COL3α1)、膠原α-1(Ⅰ)鏈(COL1α1)、膠原α-2(Ⅰ)鏈(COL1α2)、雙鏈蛋白聚糖(BGN)以及肌球蛋白-11(MYH11)屬于復(fù)合應(yīng)激ED大鼠陰莖組織中與ED相關(guān)的蛋白標志物(表3)。經(jīng)伊木薩克片藥物干預(yù)后,差異表達的蛋白質(zhì)經(jīng)IPA疾病標志物分析模塊分析, MAP1、GAPDH、BGN和MYH11屬于伊木薩克片藥物干預(yù)大鼠模型陰莖組織中與ED相關(guān)的蛋白標志物(表4)。2.2.4.2 生物標志物的相互作用網(wǎng)絡(luò)

對通過IPA疾病庫中獲得的ED大鼠模型組的差異蛋白中與ED相關(guān)7種蛋白構(gòu)建了相互作用網(wǎng)絡(luò)圖,結(jié)果顯示,上述7種蛋白質(zhì)存在直接或間接的相互作用關(guān)系。其中IL-6和 TGF-β直接或間接的影響了上述蛋白的表達(圖4A);對伊木薩克組與ED相關(guān)的4種蛋白構(gòu)建了相互作用網(wǎng)絡(luò)圖,結(jié)果顯示上述4種蛋白質(zhì)存在直接或間接的相互作用關(guān)系,其中IL-6和P38MAPK直接或間接的影響了上述蛋白的表達(圖4B)。網(wǎng)絡(luò)中的紅色點為實驗數(shù)據(jù)中的上調(diào)差異蛋白,綠色點為實驗數(shù)據(jù)中的下調(diào)表達蛋白,實線表示直接信號通路,虛線表示間接信號通路(圖4)。圖3 大鼠陰莖組織差異表達蛋白質(zhì)典型通路分布

表4 伊木薩克組大鼠陰莖組織中ED生物標志物的IPA篩選分析Table 4. Results of ingenuity pathway analysis on the ED biomarkers in the penile tissue of the ED rats model after intervention with Yimusake Tablets Gene bank Official symbol Protein name Mr PI Unique pebtide Up/down regulation P01048 MAP1 T-kininogen 1 47 700 6.52 6.00 Down P04797 GAPDH Glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase 35 800 8.03 14.00 Down P47853 BGN Biglycan 41 700 14.00 7.52 Up Q63862 MYH11 Myosin-11 152 400 49.00 6.18 Up3 討論
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本文編號：2880953