發(fā)布時間：2020-11-11 22:55

　　 大容量全合成噬菌體展示抗體庫可用于針對特異靶點生產(chǎn)高親和力抗體,是重要的單克隆抗體來源,其中親和淘篩策略是影響抗體篩選效果的關(guān)鍵。親和淘篩中的多樣性損失會降低高親和力抗體獲得概率,為探究親和淘篩多樣性損失最小的篩選策略,分別以PCSK9,CD20為靶點,用全合成噬菌體展示抗體庫淘篩,通過滴度測定與測序分析比較首輪淘篩中酸洗脫與宿主菌直接感染所得洗脫物的框架與多樣性差異。同時采取直接液體擴增、刮板后液體擴增,以及30、37℃兩種擴增溫度探究不同擴增條件對次級庫框架分布的影響。最佳淘篩方法效果通過PCSK9,CD20多輪淘篩后的單克隆phage-Elisa結(jié)果驗證。研究結(jié)果表明合并酸洗脫與宿主菌洗脫噬菌體,30℃直接液體擴增可以使合成庫首輪淘篩多樣性損失最低,采用此法獲得了靶向PCSK9與CD20的陽性序列。最終開發(fā)了一種保留全合成噬菌體抗體庫多樣性效果好、實驗周期短的淘篩方法�？晒┤�合成噬菌體抗體庫進行高效的抗體篩選,有效推進了抗體藥物早期發(fā)現(xiàn)進程。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 主要試劑與儀器
        1.1.2 菌株與抗體庫
    1.2 方法
        1.2.1 輔助噬菌體儲液與噬菌體抗體庫制備
        1.2.2 親和淘篩
        1.2.3滴度測定與測序分析
        1.2.4 制備PCSK9次級庫
        1.2.5 anti-PCSK9 sc Fv與anti-CD20 sc Fv的親和淘篩與初步鑒定
        1.2.6 單克隆phage-Elisa
2 結(jié)果
    2.1 噬菌體文庫的制備與鑒定
    2.2 洗脫方式對淘篩效果的影響
    2.3 制備方式對次級庫質(zhì)量的影響
    2.4 合成抗體庫最佳淘篩方法驗證
3 討論

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本文編號：2879869