發(fā)布時間：2020-11-05 22:54

　　 目的 比較小鼠竇前卵泡與卵泡膜間質(zhì)細(xì)胞體外共培養(yǎng)的三種模型,通過對卵泡的形態(tài)觀察、生長發(fā)育、存活率、激素分泌和減數(shù)分裂恢復(fù)能力方面進(jìn)行評價,探索一種有效、經(jīng)濟(jì)、簡便的培養(yǎng)系統(tǒng)用于對卵泡和卵泡膜間質(zhì)細(xì)胞間相互作用的相關(guān)研究。方法 選用21-25日齡C57BL/6/、鼠的卵泡膜間質(zhì)細(xì)胞與14-16日齡C57BL/6小鼠的竇前卵泡(直徑范圍110-140μm),分別采用海藻酸鈉凝膠法、Transwell間接接觸法和Transwell直接接觸法進(jìn)行共培養(yǎng),在a-MEM培養(yǎng)基(含有10%FBS、 ITS、10mIU/mLFSH、100IU/ml青霉素、O.lmg/ml鏈霉素)中體外共培養(yǎng)6天,每2天半量換液,監(jiān)測并比較各組卵泡形態(tài)、生長發(fā)育、激素分泌(睪酮、雌二醇)、存活率,6天后進(jìn)行體外成熟統(tǒng)計各組卵母細(xì)胞成熟階段。結(jié)果 在本實(shí)驗(yàn)條件下,在海藻酸鈉凝膠中培養(yǎng)的卵泡能夠始終維持其三維結(jié)構(gòu),而Transwell中培養(yǎng)的卵泡在培養(yǎng)至第5天時較三維培養(yǎng)的卵泡生長快,但對于卵泡的觀察和完整結(jié)構(gòu)的維持上不如海藻酸鈉凝膠法,相應(yīng)的雌二醇分泌水平也與卵泡的生長模式相一致。卵泡的存活率在培養(yǎng)至第5天時出現(xiàn)差異,海藻酸鈉凝膠法(77.3%)和Transwell直接接觸法(76.5%)要明顯高于Transwell間接接觸法(57.4%)(P0.05)。至于卵母細(xì)胞的減數(shù)分裂恢復(fù)情況,三種共培養(yǎng)方法之間均無統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論 通過對卵泡的形態(tài)觀察、生長發(fā)育、激素分泌和減數(shù)分裂恢復(fù)能力等方面的評價,三種共培養(yǎng)方法間無明顯差異。海藻酸鈉凝膠法具備便于觀察、維持卵泡三維結(jié)構(gòu)、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn),但卵泡的包埋和釋放過程較為繁瑣,且增加對卵泡造成損傷的機(jī)會,對卵泡的生長也有一定限制。同時,Transwell直接接觸法具有操作簡便的優(yōu)點(diǎn),與海藻酸鈉凝膠法相比有相似的卵泡存活率和卵母細(xì)胞成熟率,但相應(yīng)的成本較高,而且對卵泡的觀察不夠清晰。因此,可根據(jù)各自實(shí)驗(yàn)室的條件以及實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)設(shè)計選擇適宜的共培養(yǎng)方法,如短期(5天內(nèi))的體外培養(yǎng)可以選擇Transwell間接接觸法,而更長時間的培養(yǎng)則推薦海藻酸鈉凝膠法。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R329.2
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
材料和方法
結(jié)果
討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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1 ;Current understanding of ovarian aging[J];Science China(Life Sciences);2012年08期

本文編號：2872305