第 1 章 骨化纖維瘤的臨床病理學(xué)分析

1.1 材料與方法

1.1.1 實驗標(biāo)本
收集北京大學(xué)口腔醫(yī)院病理科 1985～2013 年間在口腔頜面外科住院部手術(shù)的骨化纖維瘤患者的所有臨床病理學(xué)資料。所有患者的標(biāo)本均為福爾馬林固定、石蠟包埋組織，行切片后 HE 染色。患者的臨床資料、影像學(xué)、手術(shù)記錄均來自于住院病例。所有的 OF 病例由病理科及放射科的三位專家從組織學(xué)，影像學(xué)和臨床表現(xiàn)進(jìn)行重新評估并重新確診。若患者的臨床影像和組織病理學(xué)資料不充分，則不被納入分析。

1.1.2 實驗方法
1）收集 1985～2013 年北京大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院病理科診斷為骨化纖維瘤病人的臨床資料；查閱和評價這些病例的臨床、影像學(xué)及病理學(xué)資料進(jìn)行重新評估，按照2005 年 WHO 頭頸部腫瘤分類的標(biāo)準(zhǔn)納入骨化纖維瘤的確診病例2）對確診病例進(jìn)行三種類型的分類，詳細(xì)辨別三種類型各自組織學(xué)特點3）對三種類型的骨化纖維瘤患者的性別、年齡、影像學(xué)等臨床資料進(jìn)行分析4）對手術(shù)方式進(jìn)行統(tǒng)計分析5）對患者進(jìn)行隨訪，并對隨訪資料進(jìn)行分析。
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1.2 結(jié)果
通過三位病理學(xué)和放射科專家重新評估這些骨化纖維瘤患者的臨床資料，并重新診斷之后，共 102 例 OF 患者納入分析。

1.2.1 臨床表現(xiàn)
所有患者的臨床癥狀一般均為無痛性面部膨隆，多為發(fā)現(xiàn)頜骨膨隆畸形或感覺不適來就診；僅有兩例生長伴疼痛，一例生長伴破潰一年。發(fā)生在上頜者，有的可造成鼻塞，眼球突出，，視力障礙，頭痛，有時可伴有感染；發(fā)生在下頜者，有時可出現(xiàn)下唇麻木，本組病人有 4 例出現(xiàn)生長伴下唇麻木；所有患者的術(shù)前病程 1 個月至 12 年不等。

1.2.2 三種類型骨化纖維瘤的年齡、性別分布
102 例 OF 患者中，經(jīng)典傳統(tǒng)型 OF82 例（82/102，80.4%），JPOF14 例（14/102，13.7%），JTOF6 例（6/102，5.9%）（圖 1，表 1，表 2）。所有 OF 患者首次就診年齡在 1~68 歲之間，平均年齡 28.4 歲，以 20～40 歲的女性多見；經(jīng)典傳統(tǒng)型 OF 患者年齡在 1~68 歲之間，平均年齡 29.6 歲；JPOF 患者年齡在 5~61歲之間，平均年齡 28.6 歲，第一個發(fā)病高峰期為 20～29 歲女性，在 40～49 年齡段有女性第二個發(fā)病高峰期；JTOF 患者發(fā)病年齡最小，在 6~17 歲之間，平均年齡 12.5 歲。與其他兩種類型不同，它明顯男性多發(fā)（5/6 例）。三種類型的骨化纖維瘤在 0～19 歲的年齡段，發(fā)病男性均多于女性，且男女發(fā)病比較 P＜0.05 具有統(tǒng)計學(xué)差異。
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第 2 章 散發(fā)性骨化纖維瘤的致病機(jī)制初探散發(fā)性骨化纖維瘤中 HRPT2 的基因突變分析

2.1 材料與方法
2.1.1 主要設(shè)備
BX40 顯微鏡（Olympus, 日本）
Mili-Q 去離子水純化系統(tǒng)（Milipore, 美國）
恒溫水浴箱 SHH-W21（長安儀器儀表公司, 北京）
SANYO biomedical freezer -80℃低溫冰箱 MDF-U52V（SANYO, 日本）
5415D 小型高速離心機(jī)（Eppendorf, 德國）
5415R 小型高速離心機(jī)（冷凍型）（Eppendorf, 德國）
Eppendorf 微量加樣器（Eppendorf，德國）
NanoDrop 8000 超微量分光光度計（Thermo，美國）
280-9823 電子天平（Switzerland）
穩(wěn)壓穩(wěn)流水平電泳儀 DYY-III （六一儀器廠，北京）
Biovision1000/26M 凝膠成像系統(tǒng)（Vilber Lourmat, 法國）
Neus gradient 梯度 PCR 儀（Eppendorf，德國）

2.1.2 主要試劑
Dneasy Tissue Kit 組織 DNA 提取試劑盒（Qiagen，美國）
Go Taq DNA Polymerase Mix（Promega，美國）
DNA maker DL2000 （Takara，大連）
引物合成：上海英駿生物技術(shù)公司
測序完成：上海英駿生物技術(shù)公司
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2.2 主要的實驗方法和步驟
OF 的病變組織和血液的基因組 DNA 提取采用硅膠膜吸附過濾方法，提取采用試劑盒 QIAamp DNA Mini Kit（Qiagen, 德國，圖 6），按照操作說明進(jìn)行。提取的基因組 DNA 進(jìn)行 1~1.5%瓊脂糖凝膠電泳，掃描成像（圖 8A）。并且使用核酸定量分析儀檢測 DNA 濃度，分裝后一部分用于 PCR，一部分-20℃低溫保存。測序反應(yīng)由上海英駿生物技術(shù)有限公司（ABI 3700 測序儀）完成。對測序發(fā)現(xiàn)異常的樣本，進(jìn)行反向測序及 3 次以上獨立 PCR 產(chǎn)物測序予以驗證。測序反應(yīng)所用的引物同 PCR 反應(yīng)引物，測序方向見表 7。核苷酸及氨基酸變異的命名依據(jù)已發(fā)表的命名指南[35]。胚系突變（Germ-linemutation）也稱遺傳性突變（hereditary mutation），是指要發(fā)育成精子或卵子的生殖細(xì)胞或未分裂的受精卵發(fā)生的基因改變。當(dāng)突變傳遞給子代時，子代個體每個細(xì)胞都攜帶這些改變。（Definition from: Office of RareDiseases at the National Institutes of Health）。在遺傳性疾病和如視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，維爾姆斯瘤(腎胚胎性惡性混合瘤)等特殊的腫瘤中，胚系突變扮演了重要的角色。本研究在散發(fā)性 OF 中發(fā)現(xiàn) HRPT2 在 1 號外顯子前內(nèi)含子處發(fā)生生殖細(xì)胞水平的突變 c.1-11dupG，見圖 9，其具體的作用有待進(jìn)一步實驗分析。
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第 2 章 散發(fā)性骨化纖維瘤的致病機(jī)制初探.....15
散發(fā)性骨化纖維瘤中 HRPT2 的基因突變分析...........15
2.1 材料與方法.........15
2.2 主要的實驗方法和步驟....16
2.2.1 DNA 提取..........16
2.2.2 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）..........16
2.2.3 PCR 產(chǎn)物檢測...........16
2.2.4 PCR 產(chǎn)物直接測序.......... 20
2.3 測序結(jié)果.....20
2.3.1 胚系突變...........20
2.3.2 多態(tài)性.......20
2.4 討論......21
2.5 結(jié)論......22
第 3 章 綜 述....... 26
顱頜面骨的良性纖維骨病損..........26

第 3 章 綜 述

顱頜面骨的良性纖維骨病損
顱頜面骨的良性纖維骨病損（Benign Fibro-Osseous Lesions，BFOL）包括反應(yīng)性骨病損、骨發(fā)育異常、腫瘤，疾病的治療方式也不盡相同。有些病損只發(fā)生于顱頜面骨，而有些病損還合并身體其他部位的骨病損[1, 2]。這一類病損都有骨和纖維組織成分，很多都有不規(guī)則的骨小梁以及球形的牙骨質(zhì)鈣化團(tuán)塊形成，它們是相同的組織學(xué)模式的變形[3]。診斷 BFOL 病變時，絕大部分都需要同時結(jié)合臨床，組織學(xué)和影像學(xué)表現(xiàn)。FD 是一種發(fā)育性疾病，可以發(fā)生在全身任何骨。2005 年的 WHO 頭頸部腫瘤分類中將 FD 分為三類，即單骨性 FD、多骨性 FD 和顱頜面 FD[5]。發(fā)生在單個骨的 FD 稱為單骨性骨纖維異常增殖癥（Monostotic Fibrous Dysplasia,MFD），發(fā)生在兩個或者兩個以上骨的 FD 稱多骨性骨纖維異常增殖癥（Polyostotic FibrousDysplasia,PFD）[4, 6]，此外，當(dāng)多骨性 FD 合并皮膚的色素沉著及多種內(nèi)分泌系統(tǒng)異常（最常見的內(nèi)分泌的異常表現(xiàn)是性腺功能亢進(jìn)引起的周圍性性早熟[8]）時，被稱為 McCune-Albright syndrome。

總結(jié)

顱頜面纖維骨病損不能按照組織學(xué)特點分型。所有這些病損中，組織學(xué)表現(xiàn)都有或多或少的重疊和類似，很多時候，同一病損可能還會伴有有其他纖維骨病損的組織學(xué)表現(xiàn)。纖維骨病損應(yīng)該由影像學(xué)表現(xiàn)和生長模式進(jìn)行分類。邊界不清涉及大部分顱面骨的為 FD,除非有相當(dāng)大的破壞或動脈瘤樣骨囊腫形成，F(xiàn)D 在普通情況下都應(yīng)該行保守治療。OF，邊界清楚，膨脹性生長，X 線中低密度影中可有高密度鈣化影，需要手術(shù)切除。骨異常增殖癥，一般與牙根關(guān)系密切，應(yīng)盡可能的保守治療。
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參考文獻(xiàn)（略）