發(fā)布時(shí)間：2017-05-11 08:16

第一章 序言

1.1 研究意義
隨著時(shí)代的發(fā)展和人們對(duì)美的追求，在化妝品不斷發(fā)展的今天，越來越多的天然動(dòng)植物成分受到了廣泛的關(guān)注，由于第四代化妝品還未真正普及，作為第三代化妝品，天然動(dòng)植物成分的添加劑依然是當(dāng)今化妝品的主流，其功效用途也從原本的美白、抗皺、抗衰老等主題逐步發(fā)展到如今的抗過敏、防腐、防曬等。在化妝品中添加植物提取物，可使產(chǎn)品在更具個(gè)性及功效性，可避開產(chǎn)品完全依靠化學(xué)成分而給消費(fèi)者帶來的心理影響，其安全性也相對(duì)較高[1]；另一方面，天然活性成分的添加，也可突出產(chǎn)品的功效作用，豐富產(chǎn)品功能性的特點(diǎn)等。因此，植物提取物應(yīng)用于化妝品中是市場(chǎng)發(fā)展的必然趨勢(shì)[2]。

本課題結(jié)合黃芩的藥物作用及有效成分分析，開發(fā)一款具有多功效的提取物成分，既符合天然提取物的安全有效，又在安全性上有一定的保證，從美白、抗過敏、祛痘多角度出發(fā)，開發(fā)化妝品產(chǎn)品。

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1.2 研究現(xiàn)狀
1.2.1 中藥化妝品
現(xiàn)代化妝品主要以精細(xì)化工為基礎(chǔ)，結(jié)合了制藥工程、生物化學(xué)、物理化學(xué)、膠體化學(xué)等逐漸發(fā)展起來的。隨著發(fā)展，現(xiàn)代化妝品逐漸暴露出越來越多的安全隱患，國(guó)際上對(duì)化妝品的環(huán)保性、安全性和天然性逐漸重視，并開始以相關(guān)的法規(guī)進(jìn)行規(guī)范。中藥化妝品是一類具有中國(guó)傳統(tǒng)特色的化妝品，結(jié)合中醫(yī)思想，在其中添加了中草藥提取的活性成分，既可滿足人們對(duì)肌膚保養(yǎng)美容的需求，又豐富消費(fèi)者的個(gè)性消費(fèi)選擇以及順應(yīng)“回歸原生態(tài)”的時(shí)尚潮流[3]。
中藥化妝品的研究主要以中藥化學(xué)、中藥藥劑為基礎(chǔ)，突出了我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)思想包含的整體觀和辯證論治等[4]。目前，中藥化妝品的研制既包括提取單味藥中有效成份進(jìn)行添加，也包括運(yùn)用中藥復(fù)方加以優(yōu)化制成，傳統(tǒng)的中藥美容多數(shù)是中藥復(fù)方制劑，包括內(nèi)服外用，在組方中各種藥物達(dá)到相互增效，融入中醫(yī)君臣佐使等思想，充分發(fā)揮中藥的美容作用[5]。
1.2.2 中藥黃芩的研究進(jìn)展

如今，隨著人類對(duì)動(dòng)物保護(hù)意識(shí)的增強(qiáng)，化妝品安全性檢測(cè)和評(píng)價(jià)方法都朝著替代試驗(yàn)的方向發(fā)展，研究替代動(dòng)物試驗(yàn)的方法在全球已經(jīng)逐漸傳播并開展著[20]。動(dòng)物替代試驗(yàn)已經(jīng)成為毒理學(xué)評(píng)價(jià)中新的研究熱點(diǎn)。隨著替代動(dòng)物試驗(yàn)的發(fā)展，原來的 3R 原則（Refine，Reduce，Replacement）也開始向 1R 原則（Replacement）方向發(fā)展，即完全的體外替代試驗(yàn)[21]。目前歐盟建立的一些替代動(dòng)物試驗(yàn)方法正處于研究和驗(yàn)證中，有部分方法已通過驗(yàn)證并發(fā)布了相關(guān)的方法標(biāo)準(zhǔn)，如EpiDermTM皮膚三維組織模型試驗(yàn)替代皮膚刺激試驗(yàn)[22]，，運(yùn)用雞胚絨毛尿囊膜血管檢測(cè)法及牛眼角膜濁度和滲透性試驗(yàn)替代眼刺激試驗(yàn)等[23]。

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第二章 黃芩中有效成分的提取及研究

黃芩的主要有效成份為黃酮類化合物，其中以黃芩苷和黃芩素的含量最高[45]。據(jù)文獻(xiàn)記載，中藥黃芩中黃芩苷和黃芩素所起的活性作用最強(qiáng)，由于黃芩中含有黃酮類成分種類較多，其活性屬于黃酮類多元作用組成，達(dá)到協(xié)同增效結(jié)果，故實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)以黃芩苷和黃芩素為主要指標(biāo)進(jìn)行考察，提取工藝則主要功效成分為指標(biāo)，提取總黃酮并開展一系列研究。本章以黃芩苷和黃芩素為主要有效成分對(duì)中藥黃芩進(jìn)行單體提取，運(yùn)用高效液相色譜法進(jìn)行單體定性定量；通過生化酶學(xué)法，對(duì)黃芩苷、黃芩素進(jìn)行酪氨酸酶抑制率測(cè)試，確定黃芩工藝目標(biāo)成分。

2.1 實(shí)驗(yàn)部分
2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
藥材：黃芩（批號(hào)：JM141203，產(chǎn)地：甘肅），購(gòu)自廣東聯(lián)豐中藥飲片有限公司。標(biāo)準(zhǔn)品：黃芩苷（批號(hào)：130829）、黃芩素（批號(hào)：131019），購(gòu)自成都普菲德生物技術(shù)有限公司。

實(shí)驗(yàn)主要試劑和儀器見表 2.1 和表 2.2。

2.1.2 黃芩苷的提取分離及純化

將黃芩干燥粉碎后，稱取 100 g，加入 10 倍的水回流加熱 2 次，每次 1 h，過濾合并濾液。濾液用稀鹽酸調(diào) pH 至 1~2，于 80 ℃下保溫靜置 0.5 h，離心收集沉淀，再將沉淀轉(zhuǎn)移至適量的蒸餾水中，充分?jǐn)嚢�，�?20% 氫氧化鈉調(diào) pH至中性，過濾，收集濾液[17]。再用稀鹽酸調(diào)節(jié) pH 至 1~2，于 80℃下保溫 0.5 h，離心收集沉淀，將沉淀分別用蒸餾水、50%乙醇、95%乙醇洗滌后，于 50 ℃真空干燥 24 h。得黃芩苷單體粗品[50]。取一定量黃芩苷粗品加入 10 倍量蒸餾水，回流加熱至 80 ℃時(shí)滴加 20%氫氧化鈉調(diào) pH 至 7.5 使粗品完全溶解，再用稀鹽酸調(diào)節(jié) pH≈6，加乙醇至溶液含醇量約 70%，過濾。濾液再用稀鹽酸調(diào) pH≈1.5~2，靜置冷卻至黃芩苷完全沉淀，過濾后室溫下真空干燥 24 h，即得黃芩苷單體。

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2.2 結(jié)果與分析
2.2.1 黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線
采用高效液相色譜法對(duì)制備所得的黃芩苷進(jìn)行分析（見圖 2.3），由結(jié)果可得，黃芩苷制備樣品與黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間均在 19.2 min 左右，基本一致，分離度高，峰形無拖尾，即制備所得為黃芩苷單體。由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得其純度約為93%，試驗(yàn)由 100 g 黃芩提取可得黃芩苷為 6.32 g，按中國(guó)藥典[61]規(guī)定黃芩苷含量不低于黃芩干藥重量 9%計(jì)算，黃芩苷提取率為 70.2%。采用高效液相色譜法對(duì)制備所得的黃芩素進(jìn)行分析（見圖 2.4），由結(jié)果可得，黃芩素制備樣品與黃芩素標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間均在 10.3 min 左右，基本一致，分離度高，峰形無拖尾，即制備所得為黃芩素單體。由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得其純度約為95%。

黃芩苷和黃芩素對(duì)酪氨酸酶活性抑制的濃度梯度結(jié)果見圖 2.5。由結(jié)果可看出，黃芩素對(duì)酪氨酸酶的抑制率在同濃度水平明顯高于黃芩苷，濃度為 1 mg/mL時(shí)，黃芩素的抑制率達(dá)到 51.2%，黃芩苷為 10.3%，抑制率相差約 4 倍。且黃芩苷抑制率隨濃度增長(zhǎng)緩慢，濃度達(dá)到 2.0 mg/mL 時(shí)，抑制率僅 14.1%，而黃芩素隨濃度增加，抑制率明顯上升。綜合可得，黃芩素在美白作用上，效果較黃芩苷更為明顯，可作為黃芩提取液的指示性成分。

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第三章 黃芩提取工藝優(yōu)化.............................16
3.1 實(shí)驗(yàn)部分..........................................16
3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 ..................................... 16
第四章 黃芩提取物的安全性評(píng)價(jià).......................27
4.1 實(shí)驗(yàn)部分..........................................27
4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 .......................................... 27
第五章 黃芩提取物多功效研究..............................38
5.1 實(shí)驗(yàn)部分..........................................38

5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 ......................................... 38

第六章 黃芩低敏美白乳液的配方設(shè)計(jì)及評(píng)價(jià)

化妝品產(chǎn)品除了必須符合法定文件及基準(zhǔn)外，還應(yīng)該注意安全性、產(chǎn)品穩(wěn)定性等因素。所以，在開發(fā)一款化妝品前，必須明確開發(fā)的目標(biāo)和要求，再對(duì)配方進(jìn)行設(shè)計(jì)及一系列的驗(yàn)證評(píng)估[98, 99]。本章實(shí)驗(yàn)旨在設(shè)計(jì)一款安全性高、穩(wěn)定性好、膚感清爽、功效明顯的黃芩低敏美白乳液，即可突出其美白功效，也可降低配方中其他成分帶來的致敏因素，適合敏感肌膚類型人群使用。本章從乳化劑的選擇和增稠劑配比兩個(gè)方面研制乳液，運(yùn)用穩(wěn)定性測(cè)試和感官評(píng)價(jià)相結(jié)合的方法評(píng)價(jià)其穩(wěn)定性、合格性，從而確定乳化劑的類型和增稠劑的配比，得到最適宜的乳液配方，通過斑貼試驗(yàn)后再進(jìn)一步研究其美白功效性。

6.1 實(shí)驗(yàn)部分
通過對(duì)乳液配方中乳化劑的選擇、增稠劑配比和黃芩提取液用量三方面來探究乳液配方，從而得出一款高效、安全、穩(wěn)定、低敏的美白乳液。乳化劑的選擇及增稠劑的配比選擇單一變量法，根據(jù)分別改變的乳化體系和增稠體系，通過理化指標(biāo)和感官評(píng)價(jià)相結(jié)合的方法，判斷其穩(wěn)定性及是否符合化妝品的要求，從而而得到理想的基礎(chǔ)配方；在配方的基礎(chǔ)上，單一改變黃芩提取液的用量，通過產(chǎn)品穩(wěn)定性試驗(yàn)和美白功效評(píng)價(jià)來研究黃芩低敏美白乳液的穩(wěn)定性、安全性、功效性。

增稠體系是化妝品配方重要的組成部分之一，不同的增稠體系對(duì)產(chǎn)品有著不同的影響，具體體現(xiàn)在產(chǎn)品的穩(wěn)定性、功效性、外觀和膚感等方面。建立增稠體系不僅是增加產(chǎn)品的稠度，更是保證產(chǎn)品的穩(wěn)定性。本實(shí)驗(yàn)添加離子含量較高的黃芩提取液，在選擇增稠體系時(shí)，應(yīng)優(yōu)先選擇耐離子的增稠劑。本文選用耐離子的漢生膠、羥乙基纖維素及 Sepiplus 400 相互復(fù)配，保持基礎(chǔ)配方不變，改變?cè)龀韯┑姆N類和用量，共設(shè)置 6 組實(shí)驗(yàn)，分別記為實(shí)驗(yàn) B1、B2、B3、B4、B5、B6，具體配方見表 6.5。

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第七章 結(jié)論

本文以黃芩為主要研究對(duì)象，對(duì)黃芩中的含量較高的單體黃芩苷和黃芩素進(jìn)行提取，運(yùn)用高效液相色譜法進(jìn)行單體定性定量；通過生化酶學(xué)法，對(duì)黃芩苷、黃芩素進(jìn)行酪氨酸酶抑制率測(cè)試，確定黃芩工藝目標(biāo)成分。結(jié)果顯示，黃芩素對(duì)酪氨酸酶抑制率明顯高于黃芩苷，濃度為 2 mg/mL 時(shí)，抑制率可達(dá)到 60%以上。由單體測(cè)試結(jié)果得出以黃芩素為黃芩提取物含量目標(biāo)成分，繼而分別考察黃芩提取液在不同溫度、液固比及提取時(shí)間下對(duì)黃芩素含量的影響，運(yùn)用響應(yīng)面中心組合試驗(yàn)分析，設(shè)置三因素三水平分組試驗(yàn)，得出最佳提取工藝為：溫度 80 ℃、液固比 20 mL/g、提取時(shí)間 2 h。通過驗(yàn)證試驗(yàn)，實(shí)際值與模型預(yù)測(cè)值基本一致。

在多功效評(píng)價(jià)研究中，當(dāng)黃芩提取液濃度為 0.2 g/mL 時(shí)，酪氨酸酶抑制率達(dá)到 75.87%，半數(shù)抑制濃度為 0.106 g/mL。黃芩提取液濃度為 0.01 g/mL 時(shí)，DPPH 清除率已達(dá)到 93.09%，濃度增加，其清除率可接近 100%。黃芩提取液濃度為 0.1 g/mL 時(shí)，透明質(zhì)酸抑制率可達(dá)到 72.1%，半數(shù)抑制濃度為 0.567 g/mL。黃芩提取液濃度具有一定的抑制痤瘡丙酸桿菌的能力，其最小抑菌濃度為 30mg/mL，抑菌效能略高于水溶性茶樹油。綜上可得，黃芩提取物具有一定的美白功效，尤其是針對(duì)自由基的高清除率；其對(duì)透明質(zhì)酸酶的抑制作用可明顯降低皮膚過敏的發(fā)生概率，可添加并制備低敏或降低過敏概率的化妝品產(chǎn)品；黃芩提取物還具有一定的祛痘抑菌功效，可用于祛痘化妝品的開發(fā)。

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參考文獻(xiàn)（略）

本文編號(hào)：356728