發(fā)布時間：2017-05-11 08:16

第一章 序言

1.1 研究意義
隨著時代的發(fā)展和人們對美的追求，在化妝品不斷發(fā)展的今天，越來越多的天然動植物成分受到了廣泛的關(guān)注，由于第四代化妝品還未真正普及，作為第三代化妝品，天然動植物成分的添加劑依然是當今化妝品的主流，其功效用途也從原本的美白、抗皺、抗衰老等主題逐步發(fā)展到如今的抗過敏、防腐、防曬等。在化妝品中添加植物提取物，可使產(chǎn)品在更具個性及功效性，可避開產(chǎn)品完全依靠化學(xué)成分而給消費者帶來的心理影響，其安全性也相對較高[1]；另一方面，天然活性成分的添加，也可突出產(chǎn)品的功效作用，豐富產(chǎn)品功能性的特點等。因此，植物提取物應(yīng)用于化妝品中是市場發(fā)展的必然趨勢[2]。

本課題結(jié)合黃芩的藥物作用及有效成分分析，開發(fā)一款具有多功效的提取物成分，既符合天然提取物的安全有效，又在安全性上有一定的保證，從美白、抗過敏、祛痘多角度出發(fā)，開發(fā)化妝品產(chǎn)品。

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1.2 研究現(xiàn)狀
1.2.1 中藥化妝品
現(xiàn)代化妝品主要以精細化工為基礎(chǔ)，結(jié)合了制藥工程、生物化學(xué)、物理化學(xué)、膠體化學(xué)等逐漸發(fā)展起來的。隨著發(fā)展，現(xiàn)代化妝品逐漸暴露出越來越多的安全隱患，國際上對化妝品的環(huán)保性、安全性和天然性逐漸重視，并開始以相關(guān)的法規(guī)進行規(guī)范。中藥化妝品是一類具有中國傳統(tǒng)特色的化妝品，結(jié)合中醫(yī)思想，在其中添加了中草藥提取的活性成分，既可滿足人們對肌膚保養(yǎng)美容的需求，又豐富消費者的個性消費選擇以及順應(yīng)“回歸原生態(tài)”的時尚潮流[3]。
中藥化妝品的研究主要以中藥化學(xué)、中藥藥劑為基礎(chǔ)，突出了我國傳統(tǒng)中醫(yī)思想包含的整體觀和辯證論治等[4]。目前，中藥化妝品的研制既包括提取單味藥中有效成份進行添加，也包括運用中藥復(fù)方加以優(yōu)化制成，傳統(tǒng)的中藥美容多數(shù)是中藥復(fù)方制劑，包括內(nèi)服外用，在組方中各種藥物達到相互增效，融入中醫(yī)君臣佐使等思想，充分發(fā)揮中藥的美容作用[5]。
1.2.2 中藥黃芩的研究進展

如今，隨著人類對動物保護意識的增強，化妝品安全性檢測和評價方法都朝著替代試驗的方向發(fā)展，研究替代動物試驗的方法在全球已經(jīng)逐漸傳播并開展著[20]。動物替代試驗已經(jīng)成為毒理學(xué)評價中新的研究熱點。隨著替代動物試驗的發(fā)展，原來的 3R 原則（Refine，Reduce，Replacement）也開始向 1R 原則（Replacement）方向發(fā)展，即完全的體外替代試驗[21]。目前歐盟建立的一些替代動物試驗方法正處于研究和驗證中，有部分方法已通過驗證并發(fā)布了相關(guān)的方法標準，如EpiDermTM皮膚三維組織模型試驗替代皮膚刺激試驗[22]，，運用雞胚絨毛尿囊膜血管檢測法及牛眼角膜濁度和滲透性試驗替代眼刺激試驗等[23]。

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第二章 黃芩中有效成分的提取及研究

黃芩的主要有效成份為黃酮類化合物，其中以黃芩苷和黃芩素的含量最高[45]。據(jù)文獻記載，中藥黃芩中黃芩苷和黃芩素所起的活性作用最強，由于黃芩中含有黃酮類成分種類較多，其活性屬于黃酮類多元作用組成，達到協(xié)同增效結(jié)果，故實驗設(shè)計以黃芩苷和黃芩素為主要指標進行考察，提取工藝則主要功效成分為指標，提取總黃酮并開展一系列研究。本章以黃芩苷和黃芩素為主要有效成分對中藥黃芩進行單體提取，運用高效液相色譜法進行單體定性定量；通過生化酶學(xué)法，對黃芩苷、黃芩素進行酪氨酸酶抑制率測試，確定黃芩工藝目標成分。

2.1 實驗部分
2.1.1 實驗材料
藥材：黃芩（批號：JM141203，產(chǎn)地：甘肅），購自廣東聯(lián)豐中藥飲片有限公司。標準品：黃芩苷（批號：130829）、黃芩素（批號：131019），購自成都普菲德生物技術(shù)有限公司。

實驗主要試劑和儀器見表 2.1 和表 2.2。

2.1.2 黃芩苷的提取分離及純化

將黃芩干燥粉碎后，稱取 100 g，加入 10 倍的水回流加熱 2 次，每次 1 h，過濾合并濾液。濾液用稀鹽酸調(diào) pH 至 1~2，于 80 ℃下保溫靜置 0.5 h，離心收集沉淀，再將沉淀轉(zhuǎn)移至適量的蒸餾水中，充分攪拌，用 20% 氫氧化鈉調(diào) pH至中性，過濾，收集濾液[17]。再用稀鹽酸調(diào)節(jié) pH 至 1~2，于 80℃下保溫 0.5 h，離心收集沉淀，將沉淀分別用蒸餾水、50%乙醇、95%乙醇洗滌后，于 50 ℃真空干燥 24 h。得黃芩苷單體粗品[50]。取一定量黃芩苷粗品加入 10 倍量蒸餾水，回流加熱至 80 ℃時滴加 20%氫氧化鈉調(diào) pH 至 7.5 使粗品完全溶解，再用稀鹽酸調(diào)節(jié) pH≈6，加乙醇至溶液含醇量約 70%，過濾。濾液再用稀鹽酸調(diào) pH≈1.5~2，靜置冷卻至黃芩苷完全沉淀，過濾后室溫下真空干燥 24 h，即得黃芩苷單體。

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2.2 結(jié)果與分析
2.2.1 黃芩苷標準曲線
采用高效液相色譜法對制備所得的黃芩苷進行分析（見圖 2.3），由結(jié)果可得，黃芩苷制備樣品與黃芩苷標準品的保留時間均在 19.2 min 左右，基本一致，分離度高，峰形無拖尾，即制備所得為黃芩苷單體。由標準曲線計算得其純度約為93%，試驗由 100 g 黃芩提取可得黃芩苷為 6.32 g，按中國藥典[61]規(guī)定黃芩苷含量不低于黃芩干藥重量 9%計算，黃芩苷提取率為 70.2%。采用高效液相色譜法對制備所得的黃芩素進行分析（見圖 2.4），由結(jié)果可得，黃芩素制備樣品與黃芩素標準品的保留時間均在 10.3 min 左右，基本一致，分離度高，峰形無拖尾，即制備所得為黃芩素單體。由標準曲線計算得其純度約為95%。

黃芩苷和黃芩素對酪氨酸酶活性抑制的濃度梯度結(jié)果見圖 2.5。由結(jié)果可看出，黃芩素對酪氨酸酶的抑制率在同濃度水平明顯高于黃芩苷，濃度為 1 mg/mL時，黃芩素的抑制率達到 51.2%，黃芩苷為 10.3%，抑制率相差約 4 倍。且黃芩苷抑制率隨濃度增長緩慢，濃度達到 2.0 mg/mL 時，抑制率僅 14.1%，而黃芩素隨濃度增加，抑制率明顯上升。綜合可得，黃芩素在美白作用上，效果較黃芩苷更為明顯，可作為黃芩提取液的指示性成分。

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第三章 黃芩提取工藝優(yōu)化.............................16
3.1 實驗部分..........................................16
3.1.1 實驗材料 ..................................... 16
第四章 黃芩提取物的安全性評價.......................27
4.1 實驗部分..........................................27
4.1.1 實驗材料 .......................................... 27
第五章 黃芩提取物多功效研究..............................38
5.1 實驗部分..........................................38

5.1.1 實驗材料 ......................................... 38

第六章 黃芩低敏美白乳液的配方設(shè)計及評價

化妝品產(chǎn)品除了必須符合法定文件及基準外，還應(yīng)該注意安全性、產(chǎn)品穩(wěn)定性等因素。所以，在開發(fā)一款化妝品前，必須明確開發(fā)的目標和要求，再對配方進行設(shè)計及一系列的驗證評估[98, 99]。本章實驗旨在設(shè)計一款安全性高、穩(wěn)定性好、膚感清爽、功效明顯的黃芩低敏美白乳液，即可突出其美白功效，也可降低配方中其他成分帶來的致敏因素，適合敏感肌膚類型人群使用。本章從乳化劑的選擇和增稠劑配比兩個方面研制乳液，運用穩(wěn)定性測試和感官評價相結(jié)合的方法評價其穩(wěn)定性、合格性，從而確定乳化劑的類型和增稠劑的配比，得到最適宜的乳液配方，通過斑貼試驗后再進一步研究其美白功效性。

6.1 實驗部分
通過對乳液配方中乳化劑的選擇、增稠劑配比和黃芩提取液用量三方面來探究乳液配方，從而得出一款高效、安全、穩(wěn)定、低敏的美白乳液。乳化劑的選擇及增稠劑的配比選擇單一變量法，根據(jù)分別改變的乳化體系和增稠體系，通過理化指標和感官評價相結(jié)合的方法，判斷其穩(wěn)定性及是否符合化妝品的要求，從而而得到理想的基礎(chǔ)配方；在配方的基礎(chǔ)上，單一改變黃芩提取液的用量，通過產(chǎn)品穩(wěn)定性試驗和美白功效評價來研究黃芩低敏美白乳液的穩(wěn)定性、安全性、功效性。

增稠體系是化妝品配方重要的組成部分之一，不同的增稠體系對產(chǎn)品有著不同的影響，具體體現(xiàn)在產(chǎn)品的穩(wěn)定性、功效性、外觀和膚感等方面。建立增稠體系不僅是增加產(chǎn)品的稠度，更是保證產(chǎn)品的穩(wěn)定性。本實驗添加離子含量較高的黃芩提取液，在選擇增稠體系時，應(yīng)優(yōu)先選擇耐離子的增稠劑。本文選用耐離子的漢生膠、羥乙基纖維素及 Sepiplus 400 相互復(fù)配，保持基礎(chǔ)配方不變，改變增稠劑的種類和用量，共設(shè)置 6 組實驗，分別記為實驗 B1、B2、B3、B4、B5、B6，具體配方見表 6.5。

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第七章 結(jié)論

本文以黃芩為主要研究對象，對黃芩中的含量較高的單體黃芩苷和黃芩素進行提取，運用高效液相色譜法進行單體定性定量；通過生化酶學(xué)法，對黃芩苷、黃芩素進行酪氨酸酶抑制率測試，確定黃芩工藝目標成分。結(jié)果顯示，黃芩素對酪氨酸酶抑制率明顯高于黃芩苷，濃度為 2 mg/mL 時，抑制率可達到 60%以上。由單體測試結(jié)果得出以黃芩素為黃芩提取物含量目標成分，繼而分別考察黃芩提取液在不同溫度、液固比及提取時間下對黃芩素含量的影響，運用響應(yīng)面中心組合試驗分析，設(shè)置三因素三水平分組試驗，得出最佳提取工藝為：溫度 80 ℃、液固比 20 mL/g、提取時間 2 h。通過驗證試驗，實際值與模型預(yù)測值基本一致。

在多功效評價研究中，當黃芩提取液濃度為 0.2 g/mL 時，酪氨酸酶抑制率達到 75.87%，半數(shù)抑制濃度為 0.106 g/mL。黃芩提取液濃度為 0.01 g/mL 時，DPPH 清除率已達到 93.09%，濃度增加，其清除率可接近 100%。黃芩提取液濃度為 0.1 g/mL 時，透明質(zhì)酸抑制率可達到 72.1%，半數(shù)抑制濃度為 0.567 g/mL。黃芩提取液濃度具有一定的抑制痤瘡丙酸桿菌的能力，其最小抑菌濃度為 30mg/mL，抑菌效能略高于水溶性茶樹油。綜上可得，黃芩提取物具有一定的美白功效，尤其是針對自由基的高清除率；其對透明質(zhì)酸酶的抑制作用可明顯降低皮膚過敏的發(fā)生概率，可添加并制備低敏或降低過敏概率的化妝品產(chǎn)品；黃芩提取物還具有一定的祛痘抑菌功效，可用于祛痘化妝品的開發(fā)。

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參考文獻（略）

本文編號：356728