發(fā)布時(shí)間：2024-12-19 03:04

　　對(duì)蝦白斑綜合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)是對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)中存在的主要病原之一,其感染機(jī)制尚未明了。本文通過2015-2016年我國部分對(duì)蝦養(yǎng)殖區(qū)采集到的WSSV病蝦,以wsv001、wsv025、wsv045三個(gè)基因?yàn)檠芯繉?duì)象對(duì)WSSV變異進(jìn)行分析,并進(jìn)一步研究了它們在WSSV侵染過程中的作用。主要包括以下內(nèi)容:第一章:為了解我國主要對(duì)蝦養(yǎng)殖區(qū)wsv001、wsv025、wsv045基因缺失變異情況,本研究取用2015-2016年從山東、河北、浙江、天津、海南和廣東等六省市采集到的104份WSSV陽性樣本,通過特異引物對(duì)目的片段進(jìn)行擴(kuò)增,借助測序?qū)�樣本的缺失變異進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,wsv001的檢出率為25%,wsv025檢出率為23.08%,wsv045檢出率為45.19%,wsv025、wsv045的檢出樣品中,未發(fā)現(xiàn)缺失突變情況;氨基酸序列比對(duì)結(jié)果顯示擴(kuò)增的wsv001片段所編碼氨基酸出現(xiàn)三類變異,包括第一類18個(gè)氨基酸小片段缺失,第二類121個(gè)氨基酸大片段缺失,第三類氨基酸插入情況,此外還有8個(gè)氨基酸存在突變。結(jié)果表明,我國不同地區(qū)wsv00...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 對(duì)蝦白斑綜合征病毒概述與研究進(jìn)展
    1 WSSV病原學(xué)
        1.1 WSSV的形態(tài)結(jié)構(gòu)
        1.2 WSSV的基因結(jié)構(gòu)
    2 WSSV流行病學(xué)
        2.1 宿主范圍
        2.2 傳播途徑
            2.2.1 水平傳播
            2.2.2 垂直傳播
    3 WSSV防治措施及RNA干擾技術(shù)的應(yīng)用
        3.1 WSSV的預(yù)防措施
        3.2 RNA干擾技術(shù)
            3.2.1 RNA干擾技術(shù)的發(fā)現(xiàn)
            3.2.2 RNA干擾的作用機(jī)制
            3.2.3 RNA干擾技術(shù)的應(yīng)用
    4 本研究的意義及目的
第二章 中國部分地區(qū)對(duì)蝦白斑綜合征wsv001、wsv025、wsv045基因缺失變異情況
    1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 組織DNA的提取
            1.2.2 WSSV陽性檢測
            1.2.3 目的片段擴(kuò)增
            1.2.4 基因克隆與序列分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 WSSV陽性檢測結(jié)果
        2.2 目的片段的PCR擴(kuò)增結(jié)果
        2.3 序列比對(duì)結(jié)果
    3 討論
第三章 wsv001、wsv025、wsv045基因克隆及原核表達(dá)
    1 wsv001、wsv025、wsv045基因克隆
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 WSSV病料的制備
            1.2.2 WSSV病毒懸液的制備
            1.2.3 WSSV病毒DNA的提取
            1.2.4 wsv001、wsv025、wsv045目的片段的克隆
        1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            1.3.1 WSSV病毒液電鏡圖
            1.3.2 wsv001、wsv025、wsv045目的片段的擴(kuò)增
    2 wsv001、wsv025、wsv045重組表達(dá)載體的構(gòu)建及蛋白表達(dá)
        2.1 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1.1 重組表達(dá)載體pBAD/gⅢA-001、pBAD/gⅢA-025、pBAD/gⅢA-045 的構(gòu)建
            2.1.2 重組表達(dá)載體pBAD/gⅢA-001、pBAD/gⅢA-025、pBAD/gⅢA-045 的誘導(dǎo)表達(dá)
            2.1.3 誘導(dǎo)表達(dá)后蛋白的Western-blot檢測
        2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.2.1 重組載體的構(gòu)建
            2.2.2 誘導(dǎo)表達(dá)及Western-blot結(jié)果
    3 討論
第四章 運(yùn)用RNA干擾技術(shù)研究wsv01、wsv025、wsv045基因在WSSV感染過程中的作用
    1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 WSSV病毒懸液的制備
            1.2.2 dsRNA的體外合成
            1.2.3 dsRNA干擾后對(duì)凡納濱對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV的影響
            1.2.4 dsRNA干擾后對(duì)凡納濱對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV后目的基因表達(dá)量的測定
            1.2.5 dsRNA干擾后凡納濱對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV后病毒拷貝數(shù)變化測定
    2 結(jié)果與分析
        2.1 dsRNA干擾后凡納濱對(duì)蝦的死亡率
        2.2 dsRNA干擾后凡納濱對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV目的基因相對(duì)表達(dá)量
        2.3 dsRNA干擾后凡納濱對(duì)蝦WSSV病毒拷貝數(shù)
    3 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：4017551