乳腺癌嚴重危害女性健康,腫瘤轉移是導致乳腺癌患者死亡的主要原因。目前,化療仍然是臨床抗轉移性乳腺癌的主要治療手段,但化療藥物缺乏腫瘤靶向性,導致治療效率不理想,并引起嚴重的毒副作用。腫瘤組織與正常組織存在微環(huán)境差異,腫瘤微環(huán)境具有低pH值、低氧、過表達特定的酶等為藥物釋放提供生物刺激,多種刺激響應性藥物遞送系統(tǒng)得以開發(fā)。據(jù)報道,乙酰肝素酶（Hpa）是哺乳動物體內(nèi)唯一可以降解硫酸乙酰肝素（HS）的糖苷內(nèi)切酶,Hpa在大多數(shù)腫瘤細胞中高表達,在正常組織中表達量較低。因此,HS可與化療藥物偶聯(lián)形成前藥,在腫瘤部位特異性釋放化療藥物。然而,HS具有大量二糖單元糖醛酸及負電荷,作為外源性物質易被單核-巨噬細胞系統(tǒng)清除。紅細胞膜具有良好的生物相容性及非免疫原性,并且紅細胞膜表面具有的多種標志物蛋白可以協(xié)助納米粒躲避單核-巨噬細胞系統(tǒng)清除及免疫攻擊。基于上述背景,我們首先構建紅細胞膜包覆的仿生納米粒靶向遞送化療藥物多西他賽（DTX）抗乳腺癌肺轉移。將DTX與HS共價連接形成Hpa響應性偶聯(lián)物前藥HS-DTX,該前藥可在中性溶液條件下自組裝形成膠束。隨后將紅細胞膜通過擠出法包覆于膠束表面。紅細胞膜包覆H...

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖5.8免疫熒光法對各組小鼠腫瘤組織切片進行CRT外排檢測結果(標尺為200μm)

鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin,CRT)外排,即CRT從腫瘤細胞內(nèi)質網(wǎng)轉運到細胞膜上,是腫瘤細胞發(fā)生免疫原性細胞死亡的標志之一[15]。為考察HDNH@MC體內(nèi)對免疫原性細胞死亡的影響,我們制備小鼠腫瘤組織免疫熒光切片,并采用激光共聚焦顯微鏡對CRT外排情況進行觀察,結果見圖....

圖5.9(a)4T1荷瘤小鼠經(jīng)不同制劑給藥,腫瘤引流淋巴結中DC細胞熟化流式細胞術結果(通過CD11c+對熟化的DC細胞進行圈門)(b)4T1荷瘤小鼠經(jīng)不同制劑給藥,腫瘤引流淋巴結中DC細胞熟化比例。數(shù)據(jù)展示:平均值±標準差(n=3)*p<0.05

免疫熒光結果證明HDNH@MC可以有效引起腫瘤細胞CRT外排,當腫瘤細胞表面帶有CRT時,其自身可作為抗原被抗原遞呈細胞如DC細胞吞噬,促使DC熟化程度增加[16]。為探究HDNH@MC能否促進DC細胞熟化,采用流式細胞術對各組小鼠腫瘤引流淋巴結中DC細胞進行分析,具體結果見圖5....

圖5.10 4T1荷瘤小鼠經(jīng)不同制劑給藥,腫瘤組織內(nèi)IFN-γ含量。數(shù)據(jù)展示:平均值±標準差(n=3)*p<0.05

DC熟化可以引起體內(nèi)抗腫瘤免疫應答,其具體表現(xiàn)之一是腫瘤組織內(nèi)某些細胞因子如干擾素γ(IFN-γ)分泌增加[17]。由于已經(jīng)證明HDNH@MC系統(tǒng)可以有效引起腫瘤細胞免疫原性死亡并導致DC熟化比例增加,因此我們采用ELISA試劑盒對各組動物腫瘤組織中IFN-γ濃度進行檢測。與DC....

圖5.11(a)4T1荷瘤小鼠經(jīng)不同制劑給藥,腫瘤中CD4+和CD8+T細胞浸潤流式細胞術結果(通過CD3+對T淋巴細胞進行圈門)(b-c)4T1荷瘤小鼠經(jīng)不同制劑給藥,單位質量腫瘤組織內(nèi)CD4+(b)和CD8+T細胞(c)數(shù)量。數(shù)據(jù)展示:平均值±標準差(n=3)*p<0.05,**p<0.01

在得到上述實驗結果支持的基礎上,我們采用流式細胞術對各組小鼠腫瘤組織內(nèi)T淋巴細胞浸潤數(shù)量及種類進行檢測,具體結果見圖5.11。生理鹽水組小鼠腫瘤組織中CD4+和CD8+T細胞浸潤較少,特別是CD8+T細胞所占比例極低。接受化療藥物DTX治療的小鼠腫瘤內(nèi)CD4+和CD8+T細胞比例....

本文編號：4054314