目的:乳腺癌是危害全球女性健康的第一殺手,化療在乳腺癌的治療過程中占有重要地位。但是,多藥耐藥（Multi Drug Resistance,MDR）的出現(xiàn)導(dǎo)致化療的失敗,極大地限制了局部晚期和轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治療效果。藥物轉(zhuǎn)運蛋白P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）能夠?qū)⒓毎麅?nèi)的化療藥物排出細胞外,其過量表達是MDR產(chǎn)生的主要原因之一。盡管在MDR細胞中關(guān)于P-gp的表達調(diào)控已被深入研究,但是目前對P-gp活性調(diào)控的研究還很少。Rack1（Receptor for Activated C Kinase 1）是細胞內(nèi)的一種支架蛋白,介導(dǎo)不同蛋白質(zhì)之間的相互作用,在腫瘤細胞抵抗化療藥物的過程中發(fā)揮重要作用。前期研究發(fā)現(xiàn)Rack1是P-gp的一個結(jié)合蛋白質(zhì),但是Rack1是否調(diào)控P-gp的轉(zhuǎn)運活性,目前尚未可知。本研究中,我們利用多藥耐藥的乳腺癌細胞系,通過一系列體外細胞學(xué)實驗,結(jié)合構(gòu)建體內(nèi)耐藥移植瘤模型,明確耐藥細胞中Rack1對P-gp轉(zhuǎn)運泵活性的調(diào)控作用,并進一步探究Rack1調(diào)控P-gp活性的分子機制,為改善臨床晚期耐藥乳腺癌的治療以及尋找新的治療靶點提供線索。方法:1....

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要 Abstract 縮略語/符號說明 前言
研究現(xiàn)狀、成果
研究目的、方法 一、Rack1的表達增加耐藥細胞對化療藥物的抵抗
1.1 對象和方法
    1.1.1 實驗用細胞系和培養(yǎng)條件
    1.1.2 實驗用儀器、試劑和耗材
    1.1.3 相關(guān)試劑配制
1.2 結(jié)果
    1.2.1 敲減Rack1的表達增加耐藥細胞對表柔比星的敏感性
    1.2.2 敲減Rack1后不改變藥物轉(zhuǎn)運蛋白P-gp的表達水平
    1.2.3 敲減Rack1的表達減弱P-gp的轉(zhuǎn)運活性
    1.2.4 敲減Rack1后增加化療藥物在細胞內(nèi)的蓄積
1.3 討論
1.4 小結(jié) 二、Src激酶活性促進腫瘤細胞耐藥
2.1 對象和方法
    2.1.1 實驗用細胞系和培養(yǎng)條件
    2.1.2 實驗用儀器、試劑和耗材
    2.1.3 試劑配制
    2.1.4 實驗方法
2.2 結(jié)果
    2.2.1 Src的表達促進細胞對化療藥物的抵抗
    2.2.2 下調(diào)Src的表達抑制P-gp的轉(zhuǎn)運活性
    2.2.3 下調(diào)Src的表達增加表柔比星的胞內(nèi)蓄積
    2.2.4 抑制Src激酶活性增加細胞對化療藥物的敏感性
    2.2.5 抑制Src激酶活性減弱P-gp的轉(zhuǎn)運能力
    2.2.6 抑制Src激酶活性后增加化療藥物在細胞內(nèi)的蓄積
2.3 討論
2.4 小結(jié) 三、Rack1介導(dǎo)Src與 P-gp之間的相互作用
3.1 對象和方法
    3.1.1 實驗用材料
    3.1.2 實驗用儀器、試劑和耗材
    3.1.3 試劑配制
    3.1.4 實驗方法
3.2 結(jié)果
    3.2.1 Rack1/Src/P-gp三者在乳腺癌耐藥細胞中形成蛋白復(fù)合體
    3.2.2 Rack1的表達介導(dǎo)Src與 P-gp的相互作用,同時抑制Cav1與P-gp的結(jié)合
    3.2.3 Src的表達不影響Rack1與P-gp的相互作用,但能抑制Cav1與P-gp的結(jié)合
    3.2.4 表達Rack1^Y246F不能介導(dǎo)Src與 P-gp的相互作用,但能增強Cav1結(jié)合P-gp
    3.2.5 Src的激酶活性調(diào)控Cav1的磷酸化
    3.2.6 Src調(diào)控Cav1的磷酸化依賴于Rack1的表達
    3.2.7 磷酸化的Cav1減弱與P-gp的結(jié)合能力,促進P-gp轉(zhuǎn)運活性
3.3 討論
3.4 小結(jié) 四、拯救Rack1^WT的表達恢復(fù)腫瘤細胞對化療藥物的抵抗
4.1 對象和方法
    4.1.1 實驗用材料
    4.1.2 實驗用儀器、試劑和耗材
    4.1.3 試劑配制
    4.1.4 實驗方法
4.2 結(jié)果
    4.2.1 耐藥細胞中拯救Rack1^WT的表達,恢復(fù)對表柔比星的抵抗
    4.2.2 體內(nèi)實驗,敲減Rack1表達的腫瘤細胞對表柔比星的敏感性增加,經(jīng)Rack1^WT拯救的腫瘤細胞對表柔比星的治療產(chǎn)生抵抗
4.3 討論
4.4 小結(jié) 全文結(jié)論 論文創(chuàng)新點 參考文獻 發(fā)表論文和參加科研情況說明 綜述 對腫瘤多藥耐藥與逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的認識
綜述參考文獻 致謝 個人簡歷



本文編號：4033226