發(fā)布時間：2024-09-17 19:29

　　目的:分別觀察miRNA-451、c-Myc以及E-cadherin在三陰性乳腺癌、癌旁組織中的表達(dá)情況以及相互關(guān)系,驗(yàn)證miRNA-451與c-Myc表達(dá)之間可能存在的調(diào)控關(guān)系,通過慢病毒轉(zhuǎn)染,觀察miRNA-451不同表達(dá)水平下c-Myc、E-cadherin蛋白表達(dá)變化,以及調(diào)控c-Myc表達(dá)對三陰性乳腺癌細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞遷移、侵襲能力以及細(xì)胞周期、凋亡的影響。方法:(1)收集2016-08至2018-02新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院三陰性乳腺癌標(biāo)本16例,采用自身配對的方式對乳腺癌組織以及癌旁組織中作為實(shí)驗(yàn)組以及對照組PCR方法和Western Blot檢測miRNA-451、c-Myc及E-cadherin的基因、蛋白表達(dá)水平;(2)首先構(gòu)建c-Myc 3’UTR野生及突變質(zhì)粒,生物信息方法分析并預(yù)測可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),PCR方法擴(kuò)增c-Myc基因3’-UTR序列,連接于熒光素酶報告檢測各組熒光素酶活性,以海腎熒光素酶作為對照,檢測細(xì)胞干預(yù)前后螢光素酶變化情況。雙熒光素酶報告結(jié)果,以螢火蟲/海腎熒光素酶比值表示;(3)構(gòu)建穩(wěn)定的MDA-MB-231細(xì)胞,培養(yǎng)穩(wěn)定傳代2-3代后...

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1-1RNA電泳圖

表7結(jié)果說明:RNA樣本A260/A280的比值是一種RNA純度檢測方法,比值范圍為1.8-2.1的RNA樣本視為合格。圖1結(jié)果說明:圖中的電泳圖中,28S與18S亮度較高,5S最弱或無條帶,條帶單一完整,視為合格RNA樣本。

圖1-2PCR引物鑒定電泳圖

2.1.2PCR產(chǎn)物電泳圖圖2結(jié)果說明:圖中分別鑒定了檢測基因c-Myc、E-cadherin以及內(nèi)參基因Actin的PCR產(chǎn)物大小(產(chǎn)物大小依循表5),圖中的PCR產(chǎn)物大小符合檢測基因的片段長度,產(chǎn)物條帶單一,其中E-cadherin基因由于本底表達(dá)水平較低,所以PCR產(chǎn)物顯....

圖1-3三陰性乳腺癌與癌旁組織基因表達(dá)量

2.1.4c-Myc、miRNA-451以及E-cadherin在乳腺癌患者臨床資料之間的表達(dá)差異2.2WesternBlot檢測結(jié)果

圖1-4目的蛋白條帶拼接圖

2.2.2蛋白檢測結(jié)果圖1結(jié)果說明:圖中分別鑒定了檢測目的蛋白c-Myc、E-cadherin以及內(nèi)參蛋白β-actin的western結(jié)果,圖中的條帶大小符合目的蛋白的大小。

本文編號：4005935