Stromal interaction molecule(STIM)1 和 STIM2 分子是一種位于內質網膜上的鈣離子感受分子,其主要作用在內質網中鈣離子清空后,通過SOCE(Store-operated Ca2+entry)等手段,介導胞外鈣離子內流,從而調整和維持細胞內部的鈣離子穩(wěn)態(tài)。而鈣離子作為細胞內重要的二級信使,參與了眾多的生命活動,其中包括了腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。這一點提示了 STIM1和STIM2對于鈣離子的調控作用可能與腫瘤轉移有關。揭示STIM1和STIM2與腫瘤細胞轉移能力之間的關系,有利于深入了解腫瘤細胞轉移的調控機制,為臨床治療提供潛在治療靶點,從而促進腫瘤治療,改善病人預后。本研究采用組織芯片、慢病毒、IPA分析、PCR、免疫熒光和細胞內動態(tài)鈣離子濃度檢測等手段,研究在正常乳腺組織以及不同類型乳腺癌組織中STIM1和STIM2分子的表達豐度,以及改變STIM2蛋白的表達豐度后,對乳腺癌細胞EMT過程的影響。研究發(fā)現(xiàn):乳腺癌組織中STIM1和STIM2分子的表達豐度均高于正常乳腺組織,提示二者能夠促進乳腺癌的轉移。不同的是,改變STIM2在乳腺癌細胞中的表達豐度...

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【學位級別】：博士

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摘要
ABSTRACT
1. 前言
    1.1. EMT在腫瘤轉移中的作用及調控機制
    1.2. STIM1和STIM2參與細胞內Ca²⁺穩(wěn)態(tài)的調節(jié)
    1.3. STIM1和STIM2參與細胞內Ca²⁺穩(wěn)態(tài)調節(jié)的同時,影響腫瘤細胞轉移
    1.4. 探究胞內鈣依賴轉錄因子在STIM2與乳腺癌EMT中間的橋梁作用
2. 材料與方法
    2.1. 材料
        2.1.1. 細胞獲取
        2.1.2. 主要試劑
        2.1.3. 主要溶液配制
        2.1.4. 主要儀器設備和耗材
    2.2. 方法
        2.2.1. 細胞培養(yǎng)
        2.2.2. 網絡數(shù)據庫查詢
        2.2.3. 細胞蛋白質提取
        2.2.4. 細胞核蛋白與胞漿蛋白提取
        2.2.5. 臨床樣本的采集和處理
        2.2.6. 免疫蛋白印跡
        2.2.7. Transwell實驗
        2.2.8. RNA抽提(TRIZOL法)
        2.2.9. 逆轉錄合成cDNA
        2.2.10. 熒光定量PCR擴增
        2.2.11. 慢病毒轉染
        2.2.12. 胞內鈣濃度測定
        2.2.13. 免疫熒光實驗
        2.2.14. 全細胞膜片鉗記錄方法與電流采集
        2.2.15. Affymetrix基因表達譜芯片篩選
        2.2.16. IPA分析
        2.2.17. 細胞上清液TGF-β1含量ELISA檢測
        2.2.18. 雙熒光素酶報告實驗
        2.2.19. 工程菌擴增提取質粒
        2.2.20. ChIp染色質免疫沉淀技術
        2.2.21. 動物實驗
        2.2.22. 數(shù)據處理和圖表制作
3. 結果
    3.1. STIM1和STIM2在不同程度乳腺癌組織的表達情況
    3.2. 細胞系水平研究STIM1和STIM2分子與腫瘤細胞遷移的能力的關系
    3.3. 構建STIM1和STIM2慢病毒干擾和過表達穩(wěn)轉細胞株
    3.4. 不同于STIM1,STIM2促使細胞發(fā)生EMT
    3.5. STIM2分子對于細胞遷移能力的作用
    3.6. 動物實驗驗證STIM2對乳腺癌細胞系增殖和轉移的作用
    3.7. STIM1與STIM2分子不同的生物學功能
    3.8. 篩選參與STIM2調控EMT過程的中間分子
    3.9. NFAT1在乳腺癌細胞中的作用
    3.10. NFAT1分子調控乳腺癌細胞EMT過程
    3.11. 篩選NFAT1調控EMT過程中的中間分子
    3.12. 驗證轉錄因子NFAT1在乳腺癌細胞中對細胞因子TGF-β1的調節(jié)作用
4. 全文主要結論
5. 討論
6. 本研究的創(chuàng)新點和下一步研究方向
    6.1. 創(chuàng)新點
    6.2. 下一步研究方向
參考文獻
英文縮略詞表
博士期間主要成果
致謝



本文編號：4003180