目的本研究通過RNA干擾技術靶向干預OPN基因,觀察OPN基因下調(diào)后非小細胞肺癌細胞株A549、SK-MES-1和OPN基因過表達后非小細胞肺癌細胞株H1703的生物學行為變化,并探討其相關機制,為非小細胞肺癌的臨床治療提供實驗基礎。方法通過免疫組化、實時熒光定量PCR方法對28例Ⅰ/Ⅱ期NSCLC及73例Ⅲ/Ⅳ期NSCLC組織中的OPN的表達進行檢測,分析OPN表達與臨床病理參數(shù)的相關性。Western blotting檢測OPN在肺癌細胞株A549、SK-MES-1、H1703和永生化人支氣管上皮細胞16HBE中的表達,通過RNA干擾技術下調(diào)A549及SK-MES-1細胞株的OPN表達,對H1703細胞株的OPN進行過表達,采用MTT 比色法、Transwell侵襲試驗檢測各細胞系對順鉑的敏感性及侵襲能力,通過Western blotting方法檢測RNA干擾后A549、SK-MES-1細胞系LDHA的表達水平,并觀察乳酸水平對A549、SK-MES-1細胞系順鉑敏感性的影響。結果1、OPN在肺癌組織中的表達明顯高于正常組織,并與NSCLC的轉移狀態(tài)、分化程度及對順鉑的敏感性相關。...

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
緒論
    參考文獻
第一部分 OPN在非小細胞肺癌組織中的表達及臨床意義
    材料與方法
        1、病例資料及標本來源
        2、實驗設備
        3、實驗試劑
        4、肺癌組織石蠟切片的制作
        5、蘇木精-伊紅染色
        6、免疫組織化學染色
        7、肺癌組織RNA提取步驟
        8、RNA反轉錄cDNA第一鏈的合成
        9、qPCR操作步驟
        10、統(tǒng)計學分析
    結果
    討論
    小結
第二部分 RNA干擾OPN基因對人非小細胞肺癌A549、SK-MES-1及H1703細胞生物學行為的影響
    材料與方法
        1、實驗材料
        2、實驗試劑
        3、相關實驗試劑的配置方法
        4、實驗細胞
        5、細胞復蘇
        6、細胞傳代
        7、細胞凍存
        8、siRNA的設計及慢病毒載體的構建
        9、siRNA轉染步驟
        10、Western Blot方法檢測細胞中OPN表達
        11、MTT分析
        12、Transwell侵襲實驗
    結果
        1、RNA干擾前后A549、SK-MES-1、H1703細胞OPN表達水平的變化
        2、RNAi干擾后對A549、SK-MES-1、H1703細胞增殖能力的影響
        3、下調(diào)OPN對A549、SK-MES-1細胞侵襲能力的影響
        4、RNAi后A549、SK-MES-1、H1703細胞對順鉑敏感性的變化
    討論
    小結
第三部分 OPN參與非小細胞肺癌細胞順鉑耐藥的機制研究
    材料和方法
        1、實驗材料
        2、實驗試劑
        3、相關實驗試劑的配置方法
        4、實驗細胞
        5、細胞復蘇
        6、細胞傳代
        7、細胞凍存
        8、siRNA細胞轉染
        9、乳酸測試盒測定細胞乳酸產(chǎn)生
        10、MTT分析
        11、Western Blot方法檢測細胞中OPN表達
    結果
        1、數(shù)據(jù)庫篩選
        2、OPN下調(diào)后A549、SK-MES-1細胞中OPN與LDHA蛋白表達
        3、OPN下調(diào)后A549、SK-MES-1細胞中乳酸生成
        4、OPN下調(diào)后乳酸對A549、SK-MES-1細胞順鉑敏感性的影響
    討論
    小結
全文總結
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀博士期間發(fā)表文章
英文縮略詞表
致謝



本文編號：3967062