研究背景及目的:干細(xì)胞研究是目前生物醫(yī)學(xué)研究的前沿領(lǐng)域,有著廣闊的應(yīng)用前景,誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)因可由體細(xì)胞重編程獲得,回避了胚胎多能干細(xì)胞(embryonic stem cells,ESCs)應(yīng)用時(shí)的倫理爭議,因此應(yīng)用前景更廣。如何提高iPSCs誘導(dǎo)效率以及精確調(diào)控細(xì)胞定向分化問題是該項(xiàng)技術(shù)推廣和應(yīng)用的瓶頸。越來越多的證據(jù)表明長鏈非編碼RN A(1 n cRN A)在細(xì)胞命運(yùn)決定及體細(xì)胞重編程方面發(fā)揮了重要的調(diào)控作用,但具體哪些lncRNA,以何種方式在iPSCs誘導(dǎo)及定向分化過程中行使功能,需要我們更深入的研究和探索。為尋找具有多能性潛能的lncRNA,本研究綜合了多個(gè)測序結(jié)果篩選出一條全新的與多能基因Oct4啟動(dòng)子結(jié)合,與多能性退出相關(guān)的lncRNA,并將其命名為 Pluripotency exit-associated lncRNA 1,簡稱 Peln1。發(fā)現(xiàn)Pelnl在重編程中呈差異表達(dá),將Pelnl敲除可提高重編程效率;若將Pelnl過表達(dá),則無法維持iPSCs的干性,細(xì)胞發(fā)生分化。提示Pelnl可能在干細(xì)...

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１染色質(zhì)內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)是誘導(dǎo)ｉＰＳＣｓ的重要瓶頸

ｏｍａｌ?＾?＂內(nèi)一丄々遍加７祕也??了“啟動(dòng)子－增強(qiáng)子染色??Ｏｆｆｌｔｅ?＾?＾?＾?質(zhì)內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)”并最終重??編程形成ｉＰＳＣ，而９９％??Ｉ?＇ｌＯＣｉ?．，■?１＃４；〇ｓｍｃｉ?未編程細(xì)胞（ＵＲＣｓ），即??］ｔ?＊?．．．?使表達(dá)ＯＳＫＭ，也由于??呔ｔ－？?１?？？....

圖１．２多能退出相關(guān)ｌｎｃＲＮＡＰｅ知ｉ的差異表達(dá)：在小鼠ｉＰＳＣｓ誘導(dǎo)過程中收??集成纖維細(xì)胞（Ｆｉｂ）、ＵＲＣ?（攜帶ＯＳＫＭ因子但未編程的細(xì)胞）和ｉＰＳＣｓ，以??

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圖１．３?ＲＡＴ－ｓｅｑ測序結(jié)果提示ＩｎｃＲＮＡ?Ｐｅ／ｎｉ結(jié)合于小鼠多能因子０ｃ／．■／的??’

ｃＷ．啟動(dòng)子與增強(qiáng)子間染色質(zhì)內(nèi)??環(huán)形成而影響ｉＰＳＣｓ多能性的形成，對重編程及ｉＰＳＣｓ多能性退出可能起到關(guān)??鍵作用。??Ｏｃｔ４?ｂｉｎｄｉｎｇ?ｏｆ?Ｐｅｌｎｌ??０ｃｔ４?ｐｒｏｍｏｔｅｒ?３＇ｅｎｈａｎｃｅｒ??５?ｅｎｈａｎｃｅｒ?，??〇?■?■?■?■??Ｓ?ｋ....

圖３．１?ＲＡＴ－Ｓｅｑ原理示意圖??

ＤＮＡ文庳進(jìn)行測序：利甩ＮＥＢＮｅｘｔ?ＣｈＩＰ－Ｓｅｑ?Ｌｉｂｒａｒｙ試劑盒將所??樽的ＤＮＡ樣品進(jìn)行ＤＮＡ文庫的建立，文庫建立成功后進(jìn)行驗(yàn)證ＤＮＡ片段大??小，制得箱合鍘序條件的ＤＮＡ樣本送測序公司進(jìn)行測序，鑒定整個(gè)裹因組中??與Ｐｅｌｎｌ?ＩｎｃＲＮＡ發(fā)生連接的靶點(diǎn)ＤＮＡ。....

本文編號：4054341