發(fā)布時間：2018-04-23 12:53

  本文選題：富血小板血漿 + Tubex��； 參考：《安徽醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的富血小板血漿(Platelet-Rich Plasma,PRP)為自體全血利用梯度離心原理離心獲得的血小板濃縮物,由激活劑或物理因素激活后能釋放多種細胞因子,如轉化生長因子-β、血小板源性生長因子、胰島素樣生長因子、表皮生長因子、上皮細胞生長因子、血管內皮細胞生長因子等。以上這些細胞因子在特定條件下能夠誘導促進多種細胞的形態(tài)發(fā)生遷移、分化和增殖,參與傷口愈合中新生血管的形成以及骨的再生;而激活后的PRP呈凝膠狀,纖維黏連蛋白、富含纖維蛋白等蛋白質,可以作為天然的三維支架材料供細胞生長,為組織的再生創(chuàng)造優(yōu)良的局部微環(huán)境。目前關于PRP的制備方法的文獻報道很多,研究發(fā)現不同的制備方法會影響到最終PRP中血小板以及生長因子的濃度,影響其作用效果的發(fā)揮。脂肪干細胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)為近年來由脂肪組織中分離出的一種具有多向分化潛能的干細胞,在特定條件誘導下可以向成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、平滑肌細胞和心肌細胞分化。自體ADSCs由于其取材方便,體外擴增速度快等特點,可以作為組織工程技術中優(yōu)秀的種子細胞,用于組織器官的修復再生。盡管以往的研究證實PRP可以對多種細胞起作用,但關于PRP對ADSCs的研究較少。本研究采用三種不同方法制備PRP,比較PRP產物中血小板濃度以及生長因子釋放量的差別;并將PRP和ADSCs共培養(yǎng),分析PRP對ADSCs增殖和成骨分化的影響,探討PRP+ADSCs復合材料用于組織工程技術的可能性,為以后的臨床研究打下基礎。方法1.本研究采用了傳統的二次離心法、三次離心法以及Tubex改良法制備PRP,通過血小板計數比較三種方法制備PRP的血小板采集率的大小;2.通過酶消化組織塊法分離出兔脂肪干細胞,并通過流式細胞術、茜素紅染色和油紅O染色方法鑒定細胞;3.將三種方法制備的PRP激活后配成5%濃度的細胞培養(yǎng)液,與上述的脂肪干細胞共培養(yǎng),通過CCK-8試劑盒檢測PRP對細胞增殖的影響;4.將三種方法制備的5%PRP培養(yǎng)液處理細胞,通過茜素紅染色、堿性磷酸酶染色和定量、RT-PCR檢測PRP對脂肪干細胞成骨分化能力的影響。結果1.血小板計數結果發(fā)現Tubex改良法制備的PRP血小板回收率顯著高于其他兩種方法,PRP中的生長因子濃度也明顯高于二次離心法和三次離心法。2.本實驗中經過酶消化法獲得的細胞表面特定抗原的表達與脂肪干細胞一致,且具備成骨分化和成脂分化能力,符合脂肪干細胞特征。3.在培養(yǎng)21d后,所有PRP處理組的脂肪干細胞均觀察到了礦化結節(jié)的形成,細胞的堿性磷酸酶活性也顯著高于礦化誘導液處理的細胞,通過實時定量PCR觀察到脂肪干細胞成骨分化標記基因的表達也明顯高于礦化誘導組。通過比較三種PRP對脂肪干細胞成骨分化的影響,我們發(fā)現Tubex法制備的PRP對脂肪干細胞成骨分化的促進作用要強于其他兩種方法制備的PRP。結論:綜合以上研究結果,我們發(fā)現Tubex法制備的PRP中血小板的含量以及生長因子的濃度均要高于二次離心法和三次離心法,其對兔脂肪干細胞的增殖、成骨分化具有明顯的促進作用,且其作用效果優(yōu)于其他兩種方法。通過Tubex密閉裝置制備PRP操作簡單,同時能夠提高血小板的采集率,其內豐富的細胞因子有利于脂肪干細胞的增殖和分化。
[Abstract]:Platelet - rich plasma ( PRP ) is a kind of platelet concentrate which is obtained by centrifugation with autologous whole blood by gradient centrifugation . It can release various cytokines , such as transforming growth factor - 尾 , platelet - derived growth factor , insulin - like growth factor , epidermal growth factor , epithelial growth factor , vascular endothelial growth factor and so on . The results showed that the expression of platelet in PRP was significantly higher than that of the other two methods . The results showed that the expression of platelet in PRP was significantly higher than that of the other two methods .

【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R329.2

【參考文獻】

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本文編號：1792054