多環(huán)芳烴菲對(duì)微生物生態(tài)毒理研究、菲降解菌的分離鑒定及降解基因克隆與表達(dá)
發(fā)布時(shí)間：2020-12-09 01:54
多環(huán)芳烴（Polycyclic aromatic hydrocarbon，PAHs）在環(huán)境中分布廣泛，極易在環(huán)境中累積并可通過食物鏈傳遞，對(duì)人類健康和生態(tài)環(huán)境具有很大危害性。菲因具有獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)，成為PAHs研究中的模式化合物，菲污染的研究不僅有利于污染環(huán)境中菲的去除，還可為其它PAHs污染的防治提供有價(jià)值的資料。 本文全面探討了菲污染對(duì)淹水稻田土壤的微生物生態(tài)毒性效應(yīng)并分離到兩株菲降解細(xì)菌，對(duì)其進(jìn)行了鑒定以及系統(tǒng)發(fā)育研究，同時(shí)進(jìn)行了降解特性和降解基因克隆及表達(dá)方面的研究，為建立有效的菲污染預(yù)警指標(biāo)體系和菲降解微生物的有效利用提供有益的參考。 本研究所獲主要結(jié)論如下： 1、以杭州臨平鎮(zhèn)附近農(nóng)田水稻土為材料，采用室內(nèi)培養(yǎng)方法系統(tǒng)研究了不同程度的菲污染對(duì)淹水稻田土壤可培養(yǎng)微生物種群以及酶活性動(dòng)態(tài)變化過程的影響。研究結(jié)果表明，不同濃度的菲對(duì)好氧細(xì)菌的生長和脲酶都具有刺激作用，并且刺激作用隨菲濃度的升高而有所加強(qiáng)；不同濃度的菲對(duì)真菌和脫氫酶則在整個(gè)培養(yǎng)過程中都具有毒性作用，特別在高濃度菲處理土樣中，這一表現(xiàn)更為明顯；各濃度的菲都對(duì)放線菌、厭氧固氮菌和產(chǎn)甲烷細(xì)菌具有急性毒性效...
【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：146 頁
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
表面活性劑影響菲被微生物的吸收的方式
類GST酶均有見報(bào)道。所有已知結(jié)構(gòu)的GST酶均為二聚體蛋白，每一單體折疊呈兩域結(jié)構(gòu)，(N端域主要包括谷膚甘膚結(jié)合位點(diǎn)并由p叩鄧pa模式組成，而C端則主要與疏水性底物的結(jié)合有關(guān)，并以a螺旋為主要組成形式)(圖1一11)。細(xì)菌GST由于研究較晚，到目前為止僅有兩種GsT的蛋白晶體結(jié)構(gòu)公開報(bào)道(圖1一11，C)，即來自大腸桿菌(Escherichiacoli)和來自于變形桿菌(尸陽reusml.ra石l’ll’s)p類GsT蛋白側(cè)ishidaetal.，1998;Rossjohnetal，1998)。圖卜llGST的亞基結(jié)構(gòu)a烏賊sigma類b人omega類e細(xì)菌Beta類dF’asciolah叩arieaMu類Fig.l·11DomainstruetureofGSTsubunitsasquidSigmaelass:bhumanomegaelass:ebacterial(Proteusmtrabilis)Betaelass;dF’QseiolaheParicaMu01韶5.蛋白質(zhì)研究揭示，真核生物的GSTN一端酪氨酸殘基為催化活性中必需的氨基酸。原核生物雖然也有細(xì)菌可在相應(yīng)位置發(fā)現(xiàn)有酪氨酸的存在，但酪氨酸并不是催化活性中的必需氨基酸或細(xì)菌相應(yīng)位置根本缺乏酪氨酸的存在。如圖1一12所示的乃刀teomjrabilisGST
互作用以極性為主，而T類和6類則是開放V形并且單體之間相互作用以疏水性為主(SheenhanDeraL，2001)。圖1一12GST活性位點(diǎn)氨基酸殘基與GSH的結(jié)合(a酪氨酸b絲氨酸c半朧氨酸)Fig.l一12Aetive一siteresiduesinGSTs(atyrbserecys)2.細(xì)菌中GST的催化類型真核生物的GST能夠催化GSH和許多親電子物質(zhì)的結(jié)合，包括鹵化和脂肪化芳香烴、過氧化物、異硫氰酸鹽等，通過這些方式來達(dá)到對(duì)這些物質(zhì)抑活降解。細(xì)菌GST雖也可催化類似反應(yīng)，但它們還有一些其它的功能使它們更適合于在降解異生物質(zhì)中發(fā)揮作用。2.1二氛甲烷脫氛醉(DMCD)DCMD是首個(gè)在功能和基因水平上闡明清楚的GST酶(vtriUeumier，2001)，此酶催化二氯甲烷歸cM)轉(zhuǎn)化成甲醛，并使某些甲基營養(yǎng)菌可以DcM作為唯一碳源和能源生長。與細(xì)菌DCMD親緣關(guān)系較近的是哺乳動(dòng)物DCMD/GST，兩者之間具有25%的蛋白序列相似性
本文編號(hào)：2906046
【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：146 頁
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
表面活性劑影響菲被微生物的吸收的方式
類GST酶均有見報(bào)道。所有已知結(jié)構(gòu)的GST酶均為二聚體蛋白，每一單體折疊呈兩域結(jié)構(gòu)，(N端域主要包括谷膚甘膚結(jié)合位點(diǎn)并由p叩鄧pa模式組成，而C端則主要與疏水性底物的結(jié)合有關(guān)，并以a螺旋為主要組成形式)(圖1一11)。細(xì)菌GST由于研究較晚，到目前為止僅有兩種GsT的蛋白晶體結(jié)構(gòu)公開報(bào)道(圖1一11，C)，即來自大腸桿菌(Escherichiacoli)和來自于變形桿菌(尸陽reusml.ra石l’ll’s)p類GsT蛋白側(cè)ishidaetal.，1998;Rossjohnetal，1998)。圖卜llGST的亞基結(jié)構(gòu)a烏賊sigma類b人omega類e細(xì)菌Beta類dF’asciolah叩arieaMu類Fig.l·11DomainstruetureofGSTsubunitsasquidSigmaelass:bhumanomegaelass:ebacterial(Proteusmtrabilis)Betaelass;dF’QseiolaheParicaMu01韶5.蛋白質(zhì)研究揭示，真核生物的GSTN一端酪氨酸殘基為催化活性中必需的氨基酸。原核生物雖然也有細(xì)菌可在相應(yīng)位置發(fā)現(xiàn)有酪氨酸的存在，但酪氨酸并不是催化活性中的必需氨基酸或細(xì)菌相應(yīng)位置根本缺乏酪氨酸的存在。如圖1一12所示的乃刀teomjrabilisGST
互作用以極性為主，而T類和6類則是開放V形并且單體之間相互作用以疏水性為主(SheenhanDeraL，2001)。圖1一12GST活性位點(diǎn)氨基酸殘基與GSH的結(jié)合(a酪氨酸b絲氨酸c半朧氨酸)Fig.l一12Aetive一siteresiduesinGSTs(atyrbserecys)2.細(xì)菌中GST的催化類型真核生物的GST能夠催化GSH和許多親電子物質(zhì)的結(jié)合，包括鹵化和脂肪化芳香烴、過氧化物、異硫氰酸鹽等，通過這些方式來達(dá)到對(duì)這些物質(zhì)抑活降解。細(xì)菌GST雖也可催化類似反應(yīng)，但它們還有一些其它的功能使它們更適合于在降解異生物質(zhì)中發(fā)揮作用。2.1二氛甲烷脫氛醉(DMCD)DCMD是首個(gè)在功能和基因水平上闡明清楚的GST酶(vtriUeumier，2001)，此酶催化二氯甲烷歸cM)轉(zhuǎn)化成甲醛，并使某些甲基營養(yǎng)菌可以DcM作為唯一碳源和能源生長。與細(xì)菌DCMD親緣關(guān)系較近的是哺乳動(dòng)物DCMD/GST，兩者之間具有25%的蛋白序列相似性
本文編號(hào)：2906046
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