發(fā)布時(shí)間：2025-01-05 23:03

　　促性腺激素釋放激素受體(Gn RHR)是G蛋白偶聯(lián)受體家族的成員,其特征是有一個(gè)七次跨膜螺旋結(jié)構(gòu),它在垂體促性腺激素細(xì)胞以及乳腺,卵巢和前列腺等的表面表達(dá)。促性腺激素釋放激素(Gn RH)與其結(jié)合后,該受體與第二信使G蛋白結(jié)合,受體的激活最終導(dǎo)致促性腺促黃體生成激素和促卵泡激素的釋放。此受體結(jié)構(gòu)的研究可為突破該受體的結(jié)構(gòu)解析瓶頸做鋪墊,了解其具體下游作用機(jī)制做鋪墊,以該受體為靶標(biāo)的藥物開發(fā)提供一定的理論基礎(chǔ),同時(shí)當(dāng)此受體作為一種藥物靶標(biāo)時(shí),為前列腺癌、子宮內(nèi)膜異位癥、青春期早熟等相關(guān)疾病的治療提供新的思路與策略。本課題欲對(duì)Gn RHR進(jìn)行表達(dá)純化與功能性研究。針對(duì)受體蛋白目的基因進(jìn)行克隆設(shè)計(jì)和克隆優(yōu)化,選擇不同框架構(gòu)建分子克隆,并對(duì)目的蛋白進(jìn)行表達(dá)純化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其蛋白表達(dá)情況。然后進(jìn)行功能性研究實(shí)驗(yàn),針對(duì)基因質(zhì)粒進(jìn)行分子突變,欲構(gòu)建成對(duì)配體響應(yīng)性良好的蛋白受體質(zhì)粒,通過報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢驗(yàn)其活力。若檢驗(yàn)受體蛋白性質(zhì)良好,熱穩(wěn)定性高、活力性強(qiáng)、單一構(gòu)象等,再進(jìn)行蛋白表達(dá)純化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其表達(dá)情況。課題針對(duì)目的基因設(shè)計(jì)了幾個(gè)框架,完成了p Fast Bac-HA-Bril-h Gn RHR-tev-O...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 G蛋白偶聯(lián)受體
        1.1.1 G蛋白偶聯(lián)受體概念
        1.1.2 G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)構(gòu)
        1.1.3 G蛋白偶聯(lián)受體功能
    1.2 促性腺激素釋放激素受體
        1.2.1 促性腺激素釋放激素受體背景介紹
        1.2.2 促性腺激素釋放激素受體遺傳變化與健康關(guān)系
        1.2.3 促性腺激素釋放激素受體作用機(jī)制
        1.2.4 促性腺激素釋放激素受體基因的表達(dá)調(diào)控
        1.2.5 促性腺激素釋放激素受體生物學(xué)意義
        1.2.6 促性腺激素釋放激素受體研究目的和意義
    1.3 國內(nèi)外在該方向的研究現(xiàn)狀及分析
        1.3.1 國外研究現(xiàn)狀
        1.3.2 國內(nèi)研究現(xiàn)狀
    1.4 本文的主要研究內(nèi)容
        1.4.1 產(chǎn)生高表達(dá)蛋白條件的摸索
        1.4.2 選擇性質(zhì)良好的蛋白
第2章 實(shí)驗(yàn)材料試劑與儀器
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
第3章 基于促性腺激素釋放激素受體分子克隆的研究
    3.1 引言
    3.2 基于促性腺激素釋放激素受體的分子克隆
        3.2.1 pFastBac-HA-Bril-hGnRHR-tev-OMBP-MBP-H8質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.2 pcDNA3-HA-Flag-H10-tev-Bril-hGnRHR質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.3 pFastBac-HA-hGnRHR-tev-OMBP-MBP質(zhì)粒的構(gòu)建
    3.3 本章小結(jié)
第4章 促性腺激素釋放激素受體野生型蛋白表達(dá)純化
    4.1 引言
    4.2 三種框架下促性腺激素釋放激素受體蛋白表達(dá)純化
        4.2.1 pFastBac-HA-Bril-hGnRHR-tev-OMBP-MBP-H8質(zhì)粒蛋白表達(dá)純化
        4.2.2 pcDNA3-HA-Flag-H10-tev-Bril-hGnRHR質(zhì)粒蛋白表達(dá)純化
        4.2.3 GnRHR-2MBPGαq/Gβ/Gγ復(fù)合物蛋白表達(dá)純化
    4.3 本章小結(jié)
第5章 促性腺激素釋放激素受體突變體雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
    5.1 引言
    5.2 促性腺激素釋放激素受體雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
        5.2.1 促性腺激素釋放激素受體在SRE、CRE、NFAT通路報(bào)告基因檢測(cè)
        5.2.2 促性腺激素釋放激素受體七組突變體報(bào)告基因檢測(cè)
        5.2.3 促性腺激素釋放激素受體三組突變體報(bào)告基因檢測(cè)
        5.2.4 促性腺激素釋放激素受體一組突變體報(bào)告基因檢測(cè)
        5.2.5 促性腺激素釋放激素受體兩組突變體報(bào)告基因檢測(cè)
        5.2.6 促性腺激素釋放激素受體四組突變體報(bào)告基因檢測(cè)
        5.2.7 促性腺激素釋放激素受體新一組突變體報(bào)告基因檢測(cè)
    5.3 本章小結(jié)
第6章 促性腺激素釋放激素受體突變體蛋白表達(dá)純化
    6.1 引言
    6.2 突變下促性腺激素釋放激素受體蛋白表達(dá)純化
    6.3 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：4023408