發(fā)布時間：2024-12-21 08:25

　　 【目的】克隆并原核和真核表達無特定病原(SPF)雞白細胞介素2(ChIL-2)和白細胞介素18(ChIL-18)基因,為后續(xù)開展ChIL-2和ChIL-18蛋白功能、生物學活性及聯(lián)合應用的免疫佐劑研究打下基礎�！痉椒ā窟\用RT-PCR擴增ChIL-2和ChIL-18基因,并進行測序和序列比對分析,分別構(gòu)建其重組原核表達質(zhì)粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18及重組真核表達質(zhì)粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18,并將重組原核表達質(zhì)粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,將重組真核表達質(zhì)粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18分別轉(zhuǎn)染非洲綠猴腎(Vero)細胞�！窘Y(jié)果】重組原核表達質(zhì)粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18經(jīng)IPTG誘導表達,其表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE和Western blotting分析,結(jié)果表明融合蛋白ChIL-2和ChIL-18在大腸桿菌中獲得高效表達,表達的蛋白分子量分別為27和23 kD;重組真核表達質(zhì)粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
        1.1.1 菌種和克隆載體
        1.1.2 主要儀器設備
        1.1.3 工具酶和試劑
    1.2 試驗方法
        1.2.1 引物合成
        1.2.2 無特定病原(SPF)雞脾淋巴細胞分離培養(yǎng)及總RNA提取
        1.2.3 ChIL-2和ChIL-18基因克隆與鑒定
        1.2.4 ChIL-2和ChIL-18基因原核表達
        1.2.5 ChIL-2和ChIL-18基因真核表達
2 結(jié)果與分析
    2.1 ChIL-2和ChIL-18基因克隆結(jié)果
        2.1.1 ChIL-2和ChIL-18基因PCR擴增結(jié)果
        2.1.2 重組質(zhì)粒pMD19-T-ChIL-2和pMD19-T-ChIL-18酶切鑒定結(jié)果
        2.1.3 ChIL-2和ChIL-18基因的測序
    2.2 ChIL-2和ChIL-18蛋白的原核表達情況
        2.2.1 重組原核表達質(zhì)粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18鑒定結(jié)果
        2.2.2 融合蛋白ChIL-2和ChIL-18的誘導表達情況
    2.3 ChIL-2和ChIL-18基因的真核表達情況
        2.3.1 重組真核表達質(zhì)粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18鑒定結(jié)果
        2.3.2 融合蛋白ChIL-2和pVAX1-ChIL-18在Vero細胞內(nèi)的表達情況
3 討 論
4 結(jié) 論



本文編號：4018696