發(fā)布時間：2020-12-04 01:53

　　脂肪酶（lipase,EC3.1.1.3）屬于羧基酯水解酶類,用于催化水解三酰甘油,廣泛存在于自然界中,其中微生物是脂肪酶的重要來源。目前對酵母、曲霉、假單胞菌、青霉、根霉等產(chǎn)脂肪酶的微生物研究較多。本課題主要研究的對象是米曲霉來源的脂肪酶,我們從NCBI數(shù)據(jù)庫（Genbank）中選擇了8種米曲霉脂肪酶基因,進行目標基因的人工合成并在大腸桿菌中實現(xiàn)異源表達。論文對脂肪酶酶活最高的脂肪酶基因進行分子改造,進一步提升其酶活性,并對獲得的脂肪酶突變體的酶學性質(zhì)進行了研究,研究結果如下:1、首先成功在大腸桿菌中表達了8種米曲霉脂肪酶基因,并對其基本酶學性質(zhì)進行了研究。對根據(jù)大腸桿菌密碼子偏好性優(yōu)化的8種米曲霉脂肪酶基因進行人工合成,連接在質(zhì)粒pET-28a（+）中,并在大腸桿菌E.coli BL21（DE3）中實現(xiàn)表達,成功構建8株重組脂肪酶工程菌。將這8株工程菌進行搖瓶發(fā)酵,離心獲得菌體,經(jīng)超聲破碎后得到8種重組脂肪酶的粗酶液,并測定其水解活性,發(fā)現(xiàn)經(jīng)過實驗室前期挖掘和研究的AOL-3的酶活力最高,為521.12 U/g。實驗對8種脂肪酶的最適溫度、pH以及底物特異性進行了初步研究,發(fā)現(xiàn)米曲... 

【文章來源】：浙江工業(yè)大學浙江省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

脂肪酶催化機理Figure1-1.Thelipasecatalysismechanism

圖 2-3 質(zhì)粒提取的凝膠電泳圖Figure 2-3. Agarose electrophoresis map of plasmidLane M:2K plusⅡMarker; lane 1-2：Plasmid of pET-28a(+)-aol-(1米曲霉脂肪酶基因表達的 SDS-PAGE 驗證-PAGE 是聚丙烯酰胺凝膠電泳，是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持泳技術，用于分離和分析蛋白質(zhì)。8 種米曲霉經(jīng)過搖瓶誘導發(fā)進行 SDS-PAGE 分析，與誘前進行比較，如圖 2-4 所示。

圖 2-3 質(zhì)粒提取的凝膠電泳圖Figure 2-3. Agarose electrophoresis map of plasmidLane M:2K plusⅡMarker; lane 1-2：Plasmid of pET-28a(+)-aol-(1-8)曲霉脂肪酶基因表達的 SDS-PAGE 驗證GE 是聚丙烯酰胺凝膠電泳，是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介技術，用于分離和分析蛋白質(zhì)。8 種米曲霉經(jīng)過搖瓶誘導發(fā)酵行 SDS-PAGE 分析，與誘前進行比較，如圖 2-4 所示。


本文編號：2896824