發(fā)布時間：2020-11-20 01:43

　　 紅樹莓(Rubus idaeus L.)為薔薇科懸鉤子屬植物,含有多種具有抗炎、抗氧化、抑菌等活性成分。隨著花色苷功能性研究的不斷深入,針對紅樹莓花色苷成分鑒定以及更加深入功能性研究有著重要意義。因此本論文以紅樹莓為原料提取花色苷,通過制備和結(jié)構(gòu)鑒定,然后利用衰老模型小鼠和肺癌細胞A549進行深入功能性研究,為紅樹莓花色苷未來在食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域應(yīng)用提供一定數(shù)據(jù)參考。主要研究結(jié)果如下:1.利用超聲輔助酶法來提取紅樹莓花色苷,經(jīng)過單因素實驗和響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計得出花色苷最佳提取工藝:果膠酶濃度為5 mg/g、料液比為1:15(g/mL)、酶解pH為3.0、酶解溫度為50℃、超聲時間為20 min、超聲功率為450 W、酶解時間60 min,在此條件下花色苷含量為127.51 mg/100 g,較超聲法提高46.38%,較酶法提高23.88%,因此說明聯(lián)合提取法與單一法相比提取更充分。2.通過大孔樹脂吸附和解吸附能力的比較,從AB-8、D101和D406中篩選出AB-8;采用花色苷濃度為40μg/mL、pH為3.0、速度為2 mL/min上樣并采用90%的乙醇進行洗脫,經(jīng)AB-8純化的紅樹莓花色苷色價為61.3±0.22、純度為27.3±0.48%;紅樹莓花色苷種類經(jīng)UPLC-Q/TOF-MS鑒定出4種花色苷,分別為:芍藥素-3-葡萄糖苷、矢車菊素-3-葡萄糖苷、矢車菊素-3-阿拉伯糖苷和矢車菊素-3-蕓香糖苷。3.通過對衰老模型小鼠進行紅樹莓花色苷干預(yù),通過小鼠的器官指數(shù)計算、器官和血清抗氧化酶活力檢測及心臟和腎臟病理學(xué)觀察,初步對紅樹莓花色苷的抗衰老作用進行評估。結(jié)果表明:紅樹莓花色苷對衰老造成的胸腺和脾臟指數(shù)的下降有一定的改善作用,使衰老小鼠器官和血清中SOD、CAT、GSH-Px活性顯著提高、降低MDA含量,同時也顯著提高皮膚組織中HYP含量,對改善內(nèi)臟和皮膚衰老狀況起到積極的作用;病理學(xué)切片顯示經(jīng)過紅樹莓花色苷干預(yù)后心肌細胞和腎臟細胞結(jié)構(gòu)清晰、數(shù)量增加、逐漸恢復(fù)接近于正常狀態(tài),說明紅樹莓花色苷對于自由基造成氧化損傷起到緩解作用、對衰老起到抑制作用。4.通過MTT法、細胞形態(tài)學(xué)觀察和流式細胞儀檢測細胞凋亡三方面進行紅樹莓花色苷對肺癌細胞A549作用的評價。結(jié)果顯示:MTT法顯示100μg/mL紅樹莓花色苷作用A549細胞48 h細胞抑制率達到80.39%。倒置顯微鏡顯示100μg/mL花色苷作用下的A549細胞附著能力下降、細胞變圓或者不規(guī)則。細胞凋亡情況顯示100μg/mL花色苷處理組細胞凋亡率為40.53%,說明紅樹莓花色苷具有抑制肺癌細胞A549增殖的作用。
【學(xué)位單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TS264.4;TS201.4
【部分圖文】：

進行 3 次平行試驗。驗設(shè)計及數(shù)據(jù)處理采用 Design Expert8.0.5 軟件處理數(shù)據(jù)， Excel2007 軟件處理。驗結(jié)果濃度對花色苷含量的作用影響 可以看出，果膠酶濃度在 2~6 mg/g 范圍內(nèi)，花色苷的含量上升的趨勢。這是因為果膠酶濃度的增加有利于果膠的分增加；當果膠酶濃度大于 5 mg/g 時，酶質(zhì)量濃度達到飽和不顯著（p>0.05），說明酶解反應(yīng)已經(jīng)基本完成，因此本實圍在 4~6 mg/g。

圖 2-2 料液比對花色苷含量的作用Fig.2-2 Effect of material/liquid ratio on the extraction of anthocyaninpH 對花色苷含量的作用影響3 可以看出，隨著 pH 的增高，提取液中花色苷含量呈現(xiàn)升，花色苷提取量不再繼續(xù)增加。這說明，在 pH3.0 左右達酶酶解效果增強，使得提取液中花色苷充分暴露，提取液色苷可以較穩(wěn)定存在于酸性環(huán)境中。因此，本實驗選擇。

圖 2-2 料液比對花色苷含量的作用Fig.2-2 Effect of material/liquid ratio on the extraction of anthocyaninpH 對花色苷含量的作用影響 可以看出，隨著 pH 的增高，提取液中花色苷含量呈現(xiàn)升，花色苷提取量不再繼續(xù)增加。這說明，在 pH3.0 左右達酶酶解效果增強，使得提取液中花色苷充分暴露，提取液色苷可以較穩(wěn)定存在于酸性環(huán)境中。因此，本實驗選擇。
【參考文獻】

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1 金紅艷;劉倩;何為;胡欽勇;柳艷飛;王曉鳳;;桑葚花色苷對乳腺癌裸鼠腫瘤組織中VEGF、p53及Ki67表達的影響[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2015年28期

2 翟慧娟;朱明明;;黃芪注射液穴位注射對D-半乳糖致衰老小鼠皮膚的干預(yù)性研究[J];中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志;2015年04期

3 李亞輝;馬艷弘;黃開紅;張宏志;;超聲波輔助酶法提取黑莓酒渣中花色苷工藝優(yōu)化及其生物活性[J];食品科學(xué);2015年06期

4 葉紹凡;;黃精多糖對力竭運動小鼠胸腺胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、T淋巴細胞亞群、巨噬細胞吞噬功能的影響[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2015年01期

5 劉劍利;劉曉;曹向宇;于慧;楊思敏;孫宇航;;稠李花色苷的純化及體外抗氧化活性[J];食品科學(xué);2015年15期

6 吳繼軍;肖更生;徐玉娟;唐道邦;溫靖;余元善;;紅樹莓與黃樹莓揮發(fā)性成分差異研究[J];食品研究與開發(fā);2014年22期

7 房琳琳;趙余慶;;樹莓的現(xiàn)代藥學(xué)及生物活性研究進展[J];沈陽藥科大學(xué)學(xué)報;2014年01期

8 徐東峰;李斌;;大孔吸附樹脂在分離純化生物堿中的應(yīng)用[J];江西中醫(yī)藥;2013年12期

9 李雄;劉爭艷;李新社;楊湘琴;徐忠;饒真;陳順明;;覆盆子枸杞生態(tài)保健酒的研發(fā)[J];中國釀造;2013年10期

10 陳亮;辛秀蘭;袁其朋;;矢車菊-3-葡萄糖的抗癌效應(yīng)研究進展[J];食品科學(xué);2013年13期

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1 班兆軍;漿果中天然抗菌成分對食源性致病菌的抑制機理研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

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1 張國坤;花楸花色苷對衰老的干預(yù)作用及機制研究[D];遼寧大學(xué);2017年

2 于清華;藍靛果花色苷超聲波-微波輔助提取純化及微膠囊化研究[D];吉林大學(xué);2017年

3 王紅;黑米提取物對黑腹果蠅和秀麗隱桿線蟲抗氧化作用的研究[D];天津科技大學(xué);2017年

4 黃旭東;紫色馬鈴薯不同部位花色苷抗前列腺癌細胞活性研究[D];浙江大學(xué);2017年

5 許勝;桑椹花色苷提取物抗氧化與抗腫瘤生物學(xué)活性研究[D];廣西大學(xué);2016年

6 李亞;體外消化對紅樹莓活性成分及防護腸道細胞損傷作用的影響[D];浙江工商大學(xué);2015年

7 陳美佳;紅樹莓果花色苷的提取純化及抗氧化性的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2014年

8 吳奇輝;紫馬鈴薯花色苷分離純化及降脂減肥活性研究[D];浙江大學(xué);2014年

9 于斌;黑米花青素對HER-2/neu高表達乳腺癌血管生成的抑制作用及其機理研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

10 李智慧;黃芪提取液對自然衰老小鼠皮膚中H_2O_2及HYP的實驗研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2009年

本文編號：2890749