發(fā)布時間：2025-01-15 15:50

　　太平洋鱈(Gadus macrocephalus)是我國北方海域重要的經(jīng)濟魚類。近年來,由于捕撈量劇增,導(dǎo)致其野生資源不斷下降。本實驗室的太平洋鱈人工繁育技術(shù)不斷取得突破,但在育苗早期過程中仍會出現(xiàn)仔稚魚突發(fā)性大量死亡現(xiàn)象。為解決這一瓶頸,本實驗從太平洋鱈自身免疫系統(tǒng)出發(fā),通過RAG1、Ig M和ISG15基因的轉(zhuǎn)錄水平來衡量太平洋鱈免疫系統(tǒng)的早期發(fā)育特點,以期為人工育苗早期階段有針對性的做好疾病防疫工作提供理論依據(jù)。首先,根據(jù)已報道的其它硬骨魚類的RAG1、Ig M和ISG15基因序列的保守區(qū)設(shè)計兼并引物,以太平洋鱈幼魚的胸腺和頭腎為實驗材料,經(jīng)過基因克隆測序,獲得目的基因片段。為研究太平洋鱈發(fā)育早期免疫系統(tǒng)形成的機制,本實驗建立了絕對熒光定量PCR檢測方法,分別對目的基因在太平洋鱈各組織以及發(fā)育早期階段中的表達水平進行了檢測。另外,利用Western Blot技術(shù)從蛋白水平對RAG1在組織中的表達差異進行了分析。實驗得出結(jié)果如下:太平洋鱈RAG1基因c DNA序列長3755 bp,包括一個1854 bp的ORF,可編碼617個氨基酸殘基,預(yù)測其分子量為69 k Da,Gen Bank...

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1太平洋鱈頭腎組織總RNAFig.1-1GelelectrophoresisoftotalRNAfromGadusmacrocephalus18s

CL顯色液于PVDF膜上，暗室透明塑料薄膜覆蓋PVDF膜。X射線攝影暗匣中曝光1min迅速浸于顯影液中顯影，然后液中定影10min以上。掃描儀成像，拍照。的克隆與分析組織中提取總RNA，進行瓊度計測定3個總RNA提取液總RNA提取效果相對較好....

圖1-4太平洋鱈RAG1標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒電泳Fig.1-4GelelectrophoresisofRAG1standardplasmidfromGadusmacrocephalus1000bp

圖1-4太平洋鱈RAG1標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒電GelelectrophoresisofRAG1standardplasmidfromRNA提取洋鱈300dph幼魚和成年雌性親魚的胸腺（、腸（In）、性腺（Go）的總RNA，進行瓊光光度計測定其濃度和A26....

圖1-7RAG1的熔解曲線

分別繪制出引物qRAG1（10μM，包括上、下游引物）不同的兩個反應(yīng)體系所對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并分別得到回歸方程和+37.50，R2=0.995；y=-3.251x+39.57，R2=0.998。根據(jù)斜率slop=10[-1/slope]-1可知，當(dāng)斜率接近-3.....

圖1-6熒光定量引物qRAG1b的檢驗Fig.1-6GelelectrophoresisofPCRproducttotesttheabsolutequantitativeprimerqRAG1b100bp

一章太平洋鱈RAG1基因cDNA的克隆與組分別繪制出引物qRAG1（10μM，個反應(yīng)體系所對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并2=0.995；y=-3.251x+39.57，R2=可知，當(dāng)斜率接近-3.322時，PCR應(yīng)體系中添加引物qRAG1（10μM，500

本文編號：4027521