發(fā)布時(shí)間：2025-01-05 20:33

　　含C1q結(jié)構(gòu)域蛋白(C1q domain containing protein,C1qDC)是一類古老的分子家族,從細(xì)菌到哺乳動(dòng)物均有分布,并在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成了多種多樣的功能。gC1q結(jié)構(gòu)域是C1qDC的標(biāo)志性結(jié)構(gòu),根據(jù)其氨基端是否含有膠原蛋白結(jié)構(gòu)域,可將C1qDC分為不含膠原蛋白結(jié)構(gòu)域的ghC1q和含膠原蛋白結(jié)構(gòu)域的C1qlike。研究表明,ghC1q在無(wú)脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物中廣泛存在,而C1q-like主要存在于脊椎動(dòng)物中。近年來(lái),C1q-like在環(huán)節(jié)動(dòng)物、軟體動(dòng)物和棘皮動(dòng)物中相繼被發(fā)現(xiàn),但其功能仍不是十分明確。目前,在長(zhǎng)牡蠣(Crassostrea gigas)基因組注釋出的337個(gè)C1qDC基因中,僅發(fā)現(xiàn)了一個(gè)C1q-like基因。本研究針對(duì)篩選出的C1q-like基因(命名為CgC1qDC-6),采用生物信息學(xué)、分子免疫學(xué)以及細(xì)胞生物學(xué)等方法,分析了該基因的序列特征及表達(dá)模式,檢測(cè)了其對(duì)病原相關(guān)分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)和病原微生物的識(shí)別活性,并研究了其在長(zhǎng)牡蠣血淋巴細(xì)胞吞噬和趨化過(guò)程中的作用。序列分...

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 C1q家族分子的結(jié)構(gòu)特征及其分類
        1.1.1 C1q家族分子的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 C1q家族分子的分類
    1.2 C1q的生物學(xué)功能
        1.2.1 C1q的識(shí)別功能
        1.2.2 C1q對(duì)細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用
    1.3 C1q-like的生物學(xué)功能
    1.4 ghC1q的生物學(xué)功能
        1.4.1 ghC1q在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中的作用
        1.4.2 ghC1q在免疫應(yīng)答中的作用
    1.5 雙殼貝類中C1qDC的研究
        1.5.1 雙殼貝類C1qDC基因的擴(kuò)張
        1.5.2 雙殼貝類C1qDC的結(jié)構(gòu)及表達(dá)特征
        1.5.3 雙殼貝類C1qDC的功能
    1.6 本研究的目的及意義
2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及菌株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)用試劑及主要儀器設(shè)備
        2.1.3 引物信息
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 長(zhǎng)牡蠣的刺激以及樣品采集
        2.2.2 長(zhǎng)牡蠣總RNA提取以及c DNA合成
        2.2.3 Cg C1qDC-6 基因的克隆及序列分析
        2.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)
        2.2.5 Cg C1qDC-6 重組蛋白的制備
        2.2.6 長(zhǎng)牡蠣組織樣品總蛋白提取
        2.2.7 Cg C1qDC-6 多克隆抗體的制備以及Western blot分析
        2.2.8 rCgC1qDC-6 蛋白的PAMPs結(jié)合活性檢測(cè)
        2.2.9 血淋巴細(xì)胞免疫熒光分析
        2.2.10 rCgC1qDC-6 蛋白的微生物結(jié)合活性檢測(cè)
        2.2.11 石蠟切片制備
        2.2.12 rCgC1qDC-6 蛋白的體外促吞噬活性檢測(cè)
        2.2.13 rCgC1qDC-6 蛋白對(duì)血淋巴細(xì)胞體外趨化活性檢測(cè)
        2.2.14 長(zhǎng)牡蠣閉殼肌CgC1qDC-6 蛋白相對(duì)濃度檢測(cè)
        2.2.15 燦爛弧菌刺激后長(zhǎng)牡蠣閉殼肌Cg C1qDC-6 蛋白濃度變化檢測(cè)
    2.3 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 Cg C1qDC-6 序列分析以及重組蛋白和多克隆抗體的制備
        3.1.1 Cg C1qDC-6 序列及結(jié)構(gòu)
        3.1.2 多序列比對(duì)及進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建
        3.1.3 Cg C1qDC-6 重組蛋白以及多克隆抗體的制備
    3.2 Cg C1qDC-6 的組織分布
        3.2.1 Cg C1qDC-6在m RNA水平上的分布
        3.2.2 Cg C1qDC-6 在蛋白水平上的分布
        3.2.3 Cg C1qDC-6 的亞細(xì)胞定位
    3.3 Cg C1qDC-6 識(shí)別活性的研究
        3.3.1 rCgC1qDC-6的PAMPs結(jié)合活性
        3.3.2 rCgC1qDC-6 的微生物結(jié)合活性
    3.4 Cg C1qDC-6 的促吞噬活性
    3.5 Cg C1qDC-6 的趨化活性
        3.5.1 rCgC1qDC-6 對(duì)血淋巴細(xì)胞的趨化活性
        3.5.2 長(zhǎng)牡蠣閉殼肌切片
        3.5.3 Cg C1qDC-6 在長(zhǎng)牡蠣閉殼肌中的相對(duì)濃度分析
        3.5.4 燦爛弧菌刺激后長(zhǎng)牡蠣閉殼肌中Cg C1qDC-6 濃度的變化
4 討論
    4.1 Cg C1qDC-6 是長(zhǎng)牡蠣中發(fā)現(xiàn)的新型C1q-like
    4.2 rCgC1qDC-6 具有廣譜的病原微生物識(shí)別活性
    4.3 rCgC1qDC-6 介導(dǎo)血淋巴細(xì)胞的吞噬作用
    4.4 rCgC1qDC-6 具有趨化血淋巴細(xì)胞的功能
5 結(jié)論
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝
附件



本文編號(hào)：4023225