細胞自噬參與抵抗營養(yǎng)不足、疾病和衰老等過程,在此過程中一些錯誤折疊的蛋白質及受損的細胞器會被分解,降解后的成分得以循環(huán)利用。本研究以細胞自噬作為研究的切入點,重點圍繞馬鈴薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）侵染煙草能夠引起細胞自噬及過氧化物酶體自噬開展了一系列研究。為驗證PVY侵染是否激活寄主細胞自噬,本研究以PVY、PVY-GFP-S和Nb-CFP-ATG8f轉基因植株為研究材料,以PVY侵染煙草為處理,以等量的PBS處理為對照,通過激光共聚焦顯微鏡觀察到PVY侵染煙草后有發(fā)光的自噬小體,且數(shù)量顯著高于對照,暗示PVY侵染煙草可以引起細胞自噬;為進一步驗證PVY侵染寄主可以引起細胞自噬,利用Western Blot檢測細胞自噬分子marker ATG8蛋白表達,結果表明PVY侵染煙草可以提高寄主ATG8蛋白含量;利用TEM進一步觀察了PVY侵染對煙草細胞病理學的影響,結果顯示PVY侵染煙草可以引起胞內過氧化物酶體中減少、葉綠體及淀粉粒的變化、自噬體在液泡降解等;為進一步驗證細胞自噬對PVY侵染復制的影響,利用基因沉默自噬基因ATG6和ATG7,煙草葉片的PVY-GFP熒光面...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1自噬小泡的形成(KlionskyDJ，2005)

（Autophagy-relatedgene,ATG），這些基因的編碼產(chǎn)物參與到自噬小泡形成的各個過程，包括自噬的誘導、小泡的成核、延伸、成熟及與液泡的融合等，這個過程中有多種自噬相關基因的參與(圖1.1)（Klionsky,2005）。在植物細胞自噬的過程中，存在種潛在....

圖2.1PVY侵染細胞自噬標記轉基因植株Nb-CFP-ATG8f中ATG8-CFP的表達變化

最后用丙酮脫水。（4）在37℃條件下，包埋劑與丙酮混合液浸泡葉片1h，純包埋處理過夜，獲得樣品制（5）將樣片制品置于透射電鏡（TEM）下進行觀察。2.2.8激光共聚焦顯微鏡觀察PVY-GFP-S侵染性克隆侵潤轉基因煙草Nb-CFP-ATG8f48h后，取接種葉片....

圖2.2PVY侵染煙草后誘發(fā)寄主產(chǎn)生細胞自噬A:PBS處理轉基因煙草Nb-CFP-ATG8f，B-F:PVY處理轉基因煙草Nb-CFP-ATG8f

中國農(nóng)業(yè)科學院碩士學位論文第二章PVY侵染引起細理組，對照組使用等量的PBS處理，利用TEM觀察PVY-GFP-S侵染細胞噬標記轉基Nb-CFP-ATG8f的細胞病理學特征，結果表明(圖2.2)，PVY侵染轉基因煙草Nb-CFP-ATG8f在葉片細胞中發(fā)現(xiàn)雙層膜的自噬體結....

圖2.3PVY侵染對煙草ATG8含量變化分析

科學院碩士學位論文第二章自噬標記蛋白ATG8的含量變化情況，結果如圖2.3所示，與PBS處理8h，煙草葉片中ATG8蛋白含量升高，3-MA與PVY侵染混合處理的葉導劑ConA處理和僅PVY侵染的樣品，也低于僅PBS處理的對照；CATG8的含量均高于對照和處理樣品；而單PV....

本文編號：4056856