香蕉枯萎病是困擾熱帶香蕉行業(yè)多年的難題。香蕉枯萎病的致病菌是真菌尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,FOC),其能侵染香蕉根部從而引起的維管束病害,導(dǎo)致維管束木質(zhì)化。由于尖孢鐮刀菌是通過土壤傳播,難以防治,對(duì)香蕉產(chǎn)業(yè)造成了毀滅性危害。香蕉枯萎病一直是熱帶作物病害的研究熱點(diǎn),目前已有越來越多的高新技術(shù)被應(yīng)用于香蕉枯萎病防治。人工肽適體(peptide aptamer或pepaptamers)是一種篩選自人工合成的隨機(jī)氨基酸文庫,可高特異性、高親和力結(jié)合靶標(biāo)蛋白質(zhì)的短肽,可用于研發(fā)具有潛在應(yīng)用價(jià)值的生物抗菌劑。將人工肽適體應(yīng)用于香蕉枯萎病防治,是香蕉產(chǎn)業(yè)病害防控研究的新突破。本研究基于高容量肽適體文庫,在作用靶標(biāo)未知的情況下對(duì)尖孢鐮刀菌孢子進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn),篩選出能夠特異性抑制尖孢鐮刀菌,且對(duì)香蕉植株無害、環(huán)境友好型的肽適體,并研究其作用機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:(1)通過抑菌實(shí)驗(yàn)初步篩選出對(duì)尖孢鐮刀菌有抑制作用的肽適體SNP-D4,測(cè)序結(jié)果顯示其全長576 bp,編碼191個(gè)氨基酸,整體蛋白分子量大小為21 kDa。(2)構(gòu)建SNP-D4與支架蛋白SN的原...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２肽適體單克隆ＰＣＲ結(jié)果??注：Ｍ為Ｍａｒｋｅｒ，１－３２為不同的肽適體單克隆

３．?１．?１?肽適體文庫的轉(zhuǎn)化與ＰＣＲ驗(yàn)證??通過文庫質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，從肽適體文庫中分離鑒定得到３２個(gè)肽適體單克隆，ＰＣＲ??驗(yàn)證結(jié)果見圖２。如圖所示，３２個(gè)肽適體單克隆均能被特異性引物擴(kuò)增，得到明??亮單一的條帶，其實(shí)際片段大小在７５０ｂｐ左右，與預(yù)期大小一致，表明轉(zhuǎn)化文庫??質(zhì)粒....

圖３?ＳＮＰ－Ｄ４抑制ＦＯＣ４孢子萌發(fā)??注：紅色圓圈標(biāo)記的為未萌發(fā)的孢子，紅色箭頭標(biāo)記的為萌發(fā)受到抑制的孢子

?３．１．２?抑菌實(shí)驗(yàn)篩選肽適體結(jié)果??抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖３，在３２個(gè)肽適體單克隆中，發(fā)現(xiàn)５種肽適體對(duì)尖孢鐮刀??菌孢子具有抑制作用，其中ＳＮＰ－Ｄ４效果最佳。從圖３中可以看出，在相同處理??時(shí)間下，ＰＢＳ?（磷酸鹽緩沖液）處理組與轉(zhuǎn)入ｐＴＲＧ－ＳＮ載體的ｒｅｐｏｒｔｅｒ菌株的細(xì)?....

圖４?ＳＮＰ－Ｄ４的核苷酸與氨基酸序列??注：紅色邊框標(biāo)記部分為可變肽段?

為了確定具有孢子萌發(fā)抑制活性的ＳＮＰ－Ｄ４的序列信息，提取表達(dá)ＳＮＰ－Ｄ４??的質(zhì)粒并測(cè)序，得到ＳＮＰ－Ｄ４全長５７６?ｂｐ，編碼１９１個(gè)氨基酸，整體蛋白分子量??大小為２１?ｋＤａ?（圖４）。其編碼的可變肽段序列為共１６個(gè)氨基酸，序列為ＶＴＦＬ??ＶＮＴＹＰＮＧ?ＶＯＳＲ?Ａ?....

圖９透析后的ＳＮ和ＳＮＰ－Ｄ４蛋白電泳??注：Ｍ?為?Ｍａｒｋｅｒ，?１、２?為?ＳＮ?蛋白，３、４?為?ＳＮＰ－Ｄ４?蛋白

??將純化之后的蛋白進(jìn)行透析，結(jié)果如圖９，成功得到了條帶清晰、幾乎沒有??雜蛋白的ＳＮ和ＳＮＰ－Ｄ４蛋白。??ｋＤａ?Ｍ?１?２?３?４??１１６．０??：：：〇??３５．０??２５０?－??、■?？二�。颍模�??１８－４??１?．??圖９透析后的ＳＮ和ＳＮＰ－Ｄ４蛋白電泳??注....

本文編號(hào)：4056655