發(fā)布時間：2025-01-10 20:42

　　南方根結(jié)線蟲是一種危害作物生長的植物寄生性線蟲,會在作物的根部形成大量根結(jié),阻礙植物根部對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收,甚至?xí)��?yán)重破壞植物根部而導(dǎo)致植物死亡。據(jù)報道,全世界范圍內(nèi),每年由線蟲造成的損失,超過1250億美元,其中絕大多數(shù)是由于根結(jié)線蟲造成的�；瘜W(xué)農(nóng)藥的使用對環(huán)境和人體健康造成的危害越來越嚴(yán)重,對化學(xué)農(nóng)藥的使用限制也越來越嚴(yán)格。使用生物農(nóng)藥并配合其它方法來防治包括根結(jié)線蟲在內(nèi)的農(nóng)業(yè)病害,有著十分重要的意義。尋找合適的微生物資源,開發(fā)利用生物農(nóng)藥進(jìn)行生物防治,無疑具有遠(yuǎn)大的前景。本研究分離篩選了一系列對南方根結(jié)線蟲具有一定生防作用的菌株,并對其生防效果進(jìn)行了研究,以期為開發(fā)新的植物寄生性線蟲生防菌劑提供新的菌種資源。主要研究結(jié)果如下:(1)殺線蟲菌株的篩選。通過菌株發(fā)酵液觸殺和揮發(fā)性氣體抑制兩種作用方式來篩選防治根結(jié)線蟲的菌株。發(fā)酵液觸殺試驗(yàn)從分離獲得的23株細(xì)菌和22株放線菌中篩選出E5和E9兩株對南方根結(jié)線蟲防效突出的細(xì)菌。這兩株細(xì)菌在用LB培養(yǎng)基37℃恒溫振蕩培養(yǎng)48h后,其發(fā)酵液處理南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲(J2)12h,對線蟲幼蟲的的校正致死率均達(dá)到90%以上。通過揮發(fā)性氣體抑制試驗(yàn),...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 根結(jié)線蟲的分類
    1.2 根結(jié)線蟲的危害
    1.3 根結(jié)線蟲生物防治方法
        1.3.1 生物防治的一般定義
        1.3.2 真菌作為BCA防治根結(jié)線蟲
            1.3.2.1 捕食性真菌
            1.3.2.2 卵寄生真菌
            1.3.2.3 具有黏性孢子的食線蟲真菌
            1.3.2.4 叢枝菌根內(nèi)生真菌
            1.3.2.5 微生物毒素
            1.3.2.6 拮抗根結(jié)線蟲的放線菌
            1.3.2.7 拮抗根結(jié)線蟲的細(xì)菌
            1.3.2.8 其它生物體
    1.4 生物防治藥劑的主要審批機(jī)構(gòu)
        1.4.1 美國國家環(huán)境保護(hù)局(EPA)
        1.4.2 法國農(nóng)業(yè)部和漁業(yè)部
        1.4.3 有機(jī)物質(zhì)評估研究所(OMRI)
    1.5 生防藥劑市場
        1.5.1 市場上的主要的防治根結(jié)線蟲的真菌產(chǎn)品
            1.5.1.1 BIO-ACT?/MELOCONWG
            1.5.1.2 BOTANIGARD?;MYCOTROL?
            1.5.1.3 BIOSTAT?
            1.5.1.4 MYCOTAL?
            1.5.1.5 TRIANUM?
            1.5.1.6 MET52?
            1.5.1.7 NEMAXXIONBIOL?
            1.5.1.8 REMG?
        1.5.2 流體態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品
        1.5.3 固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品
        1.5.4 生防藥劑的配方
    1.6 本研究的目的和意義
    1.7 研究內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 用于分菌的試驗(yàn)樣品
        2.1.2 靶標(biāo)線蟲
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 線蟲染色材料
        2.1.5 主要試劑
    2.2 主要儀器
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 樣品分菌
            2.3.1.1 芽孢菌的篩選
            2.3.1.2 放線菌的篩選
        2.3.2 土壤滅菌及番茄育苗
        2.3.3 南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲和根結(jié)線蟲蟲卵的獲得
        2.3.4 細(xì)菌發(fā)酵液的制備
        2.3.5 放線菌發(fā)酵液的制備
        2.3.6 殺線蟲菌株觸殺初篩
        2.3.7 殺線蟲菌株揮發(fā)性氣體(VOC)抑制線蟲試驗(yàn)
        2.3.8 發(fā)酵液對線蟲侵染活性的影響
            2.3.8.1 根結(jié)線蟲的處理
            2.3.8.2 番茄植株的處理
            2.3.8.3 番茄根部的染色
        2.3.9 生防細(xì)菌發(fā)酵液對線蟲胚胎發(fā)育影響
        2.3.10 生防細(xì)菌發(fā)酵上清液對南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲活性的影響
        2.3.11 生防細(xì)菌的盆栽驗(yàn)證試驗(yàn)
            2.3.11.1 滅菌土壤、番茄幼苗及二齡幼蟲懸液的準(zhǔn)備
            2.3.11.2 發(fā)酵液的制備
            2.3.11.3 試驗(yàn)設(shè)計
            2.3.11.4 土壤蟲口密度統(tǒng)計方法
            2.3.11.5 生防菌對南方根結(jié)線蟲防效的評定方法
        2.3.12 生防細(xì)菌對根結(jié)線蟲致死率及盆栽試驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)分析
        2.3.13 根結(jié)線蟲生防細(xì)菌的形態(tài)學(xué)鑒定
        2.3.14 三株根結(jié)線蟲生防細(xì)菌的生理生化試驗(yàn)
        2.3.15 三株根結(jié)線蟲生防細(xì)菌的分子生物學(xué)鑒定
            2.3.15.1 基因組DNA的提取
            2.3.15.2 目的片段的擴(kuò)增
3 結(jié)果與分析
    3.1 從試驗(yàn)樣品中初步分離生防菌株
    3.2 南方根結(jié)線蟲的活性驗(yàn)證
    3.3 使用菌株發(fā)酵液對南方根結(jié)線蟲的觸殺試驗(yàn)
        3.3.1 細(xì)菌發(fā)酵液對南方根結(jié)線蟲幼蟲的致死率
        3.3.2 放線菌發(fā)酵液對南方根結(jié)線蟲幼蟲的致死率
    3.4 殺線蟲菌株揮發(fā)性氣體(VOC)抑制南方根結(jié)線蟲幼蟲試驗(yàn)
        3.4.1 細(xì)菌揮發(fā)性氣體抑制南方根結(jié)線蟲幼蟲試驗(yàn)
        3.4.2 放線菌揮發(fā)性氣體抑制線蟲試驗(yàn)
    3.5 生防菌株發(fā)酵液對根結(jié)線蟲侵染活性的影響
    3.6 生防細(xì)菌發(fā)酵液對根結(jié)線蟲胚胎發(fā)育的影響
        3.6.1 南方根結(jié)線蟲胚胎發(fā)育的過程
        3.6.2 生防細(xì)菌發(fā)酵液處理卵囊后對線蟲胚胎發(fā)育的影響
        3.6.3 電子顯微鏡觀察生防細(xì)菌發(fā)酵液處理卵囊后蟲卵卵殼特征
    3.7 生防細(xì)菌發(fā)酵上清液對南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲的殺蟲效果
        3.7.1 生防細(xì)菌發(fā)酵上清液對南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲(J2)的致死率
        3.7.2 生防細(xì)菌發(fā)酵上清液在不同振蕩培養(yǎng)時間對南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲的致死率
    3.8 生防細(xì)菌發(fā)酵液防治南方根結(jié)線蟲盆栽試驗(yàn)
        3.8.1 生防細(xì)菌發(fā)酵液灌根對南方根結(jié)線蟲防治效果的盆栽試驗(yàn)
        3.8.2 生防細(xì)菌發(fā)酵液處理含有南方根結(jié)線蟲蟲土試驗(yàn)
    3.9 殺線蟲生防細(xì)菌的鑒定
        3.9.1 三株生防細(xì)菌的形態(tài)學(xué)鑒定
        3.9.2 三株生防細(xì)菌的生理生化試驗(yàn)
        3.9.3 三株生防細(xì)菌的16SrDNA分子鑒定
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：4025420