發(fā)布時間：2024-07-10 21:57

　　昆蟲缺乏適應(yīng)性免疫系統(tǒng),完全依靠先天免疫來抵抗病原物的入侵。當(dāng)病原物入侵昆蟲時,昆蟲通過模式識別受體(Pattern recognition receptors,PRRs)識別并結(jié)合病原物表面高度保守的病原相關(guān)分子模式,從而啟動一系列的免疫應(yīng)答,如吞噬和包囊作用以及誘導(dǎo)抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)的產(chǎn)生。C-型凝集素(C-type lectins,CTLs)作為一種PRRs,在昆蟲抵御病原物的過程中發(fā)揮著重要的作用。腸球菌屬于一類腸道共生菌,正常情況下在宿主腸道中保持動態(tài)平衡,但是當(dāng)其進(jìn)入血腔時,可導(dǎo)致昆蟲產(chǎn)生疾病,如敗血癥等。前期研究中,我們發(fā)現(xiàn)CTL3在棉鈴蟲脂肪體中合成并分泌到血腔中,從而參與血細(xì)胞介導(dǎo)的吞噬和包囊反應(yīng)。在本研究中,我們以從棉鈴蟲腸道中分離出的一種共生菌——蒙氏腸球菌(Enterococcus mundtii)為研究對象,探究兩種CTLs(CD209和CTL3)在調(diào)控棉鈴蟲腸道和血淋巴E.mundtii動態(tài)平衡過程中的功能。研究結(jié)果如下:1.CD209在變態(tài)期棉鈴蟲的中腸高表達(dá),且腸道菌群可以誘導(dǎo)中腸CD209的表達(dá),而E.mu...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1. 前言
    1.1 昆蟲免疫機(jī)制
        1.1.1 昆蟲系統(tǒng)免疫的識別機(jī)制
        1.1.2 昆蟲局部免疫
    1.2 C-型凝集素
    1.3 蒙氏腸球菌
    1.4 研究背景及意義
2. 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 棉鈴蟲幼蟲
        2.1.2 菌株
        2.1.3 試劑和藥品
        2.1.4 儀器設(shè)備
        2.1.5 引物序列
    2.2 實驗方法
        2.2.1 CD209序列與結(jié)構(gòu)分析
        2.2.2 不同發(fā)育階段的棉鈴蟲各組織RNA的提取
        2.2.3 合成cDNA第一鏈及質(zhì)量檢測
        2.2.4 實時熒光定量PCR(qRT-PCR)
        2.2.5 CD209的原核表達(dá)與純化
        2.2.6 Western blot檢測制備的抗CD209抗體特異性
        2.2.7 QRT-PCR和Western blot分別檢測CD209的時空表達(dá)模式
        2.2.8 細(xì)菌的分離與鑒定
        2.2.9 蛋白與細(xì)菌結(jié)合實驗
        2.2.10 涂平板檢測抗生素處理對棉鈴蟲腸道菌群的影響
        2.2.11 腸道細(xì)菌genomic DNA的提取及檢測
        2.2.12 QRT-PCR檢測腸道菌群對棉鈴蟲體內(nèi)CD209的表達(dá)影響
        2.2.13 QRT-PCR檢測喂食E.mundtii對棉鈴蟲中腸CD209的表達(dá)影響
        2.2.14 CD209的RNAi實驗
        2.2.15 QRT-PCR檢測RNAi敲降CD209后部分抗菌肽基因的表達(dá)情況
        2.2.16 QPCR定量分析腸道和血淋巴中的E.mundtii
        2.2.17 體內(nèi)吞噬實驗
        2.2.18 轉(zhuǎn)錄組測序和生物信息學(xué)分析
        2.2.19 三種抗菌肽的原核表達(dá)、純化與抑菌活性分析
        2.2.20 測量幼蟲的體長、體重和發(fā)育時間
3. 結(jié)果與分析
    3.1 CD209序列與結(jié)構(gòu)分析
    3.2 重組蛋白CD209的原核表達(dá)、純化和抗體特異性檢測
    3.3 CD209在變態(tài)期棉鈴蟲中腸高表達(dá)
    3.4 蒙氏腸球菌(E.mundtii)和巨大芽孢桿菌(megaterium)的分離和鑒定,以及與CD209的結(jié)合活性
    3.5 腸道菌群整體誘導(dǎo)中腸CD209表達(dá),而E.mundtii抑制中腸CD209的表達(dá)
    3.6 RNAi敲降CD209后腸道抗菌肽基因表達(dá)分析
    3.7 E.mundtii可以從腸道逃逸到血腔,且CTL3在該過程發(fā)揮重要作用
    3.8 CTL3的細(xì)菌結(jié)合活性
    3.9 CTL3促進(jìn)血細(xì)胞吞噬 E.mundtii
    3.10 受CTL3控制的AMPs能抑制E.mundtii的生長
    3.11 注射E.mundtii后棉鈴蟲生長發(fā)育遲緩
4. 討論
    4.1 CD209維持腸道E.mundtii動態(tài)平衡的可能機(jī)制
    4.2 CTL3維持血淋巴E.mundtii動態(tài)平衡的可能機(jī)制
    4.3 血淋巴中高豐度的E.mundtii導(dǎo)致幼蟲發(fā)育緩慢
5. 小結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間論文發(fā)表情況
致謝



本文編號：4004794