發(fā)布時(shí)間：2015-01-09 12:34

 

【摘要】 1背景與目的我國(guó)脊柱結(jié)核發(fā)病率占全身骨、關(guān)節(jié)結(jié)核病發(fā)病率的首位。家庭經(jīng)濟(jì)貧困、自身營(yíng)養(yǎng)不良、HIV病毒感染以及結(jié)核菌耐藥性等多種因素加速了脊柱結(jié)核的傳播。脊柱結(jié)核容易導(dǎo)致患者發(fā)生脊柱后凸畸形和下肢截癱等嚴(yán)重并發(fā)癥。在脊柱結(jié)核發(fā)病早期，感染常發(fā)生于椎體前部，但伴隨疾病的發(fā)展，感染往往向前縱韌帶方向播散，最終導(dǎo)致鄰近多個(gè)椎體都發(fā)生結(jié)核破壞。當(dāng)相鄰椎體均受到結(jié)核破壞時(shí)，椎間盤也將受到破壞，發(fā)生變性壞死。雖然椎間盤發(fā)生破壞是脊柱結(jié)核疾病的一個(gè)重要疾病特征，但是關(guān)于結(jié)核菌破壞椎間盤的發(fā)生機(jī)制卻鮮少報(bào)道。近期研究發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metal—loproteinases，MMPs)和含I型血小板結(jié)合蛋白基序(TSP)的解聚蛋白樣金屬蛋白酶(a disintegrin like and metal loproteinasewith thrombospondin type1motifs，ADAMTS)在細(xì)胞外基質(zhì)破壞中發(fā)揮重要作用。MMPs是一類含有Zn2+的蛋白酶家族，由于其具有分解細(xì)胞外基質(zhì)成分的功能，在人體生理性組織重構(gòu)和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。含I型血小板結(jié)合蛋白基序(TSP)的解聚蛋白樣金屬蛋白酶(a disintegrinlike and metal loproteinase with thrombospondin type1motifs，ADAMTS)是一類Zn2+依賴的分泌型金屬蛋白酶，而其中的ADAMTS-4是一種軟骨基質(zhì)聚集蛋白聚糖（aggrecan）的降解酶。ADAMTS-4對(duì)于關(guān)節(jié)軟骨中含有的大量aggrecan具有降解作用，導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨的抗壓力和張力等物理屬性下降。由于在脊柱結(jié)核患者椎間盤的破壞過(guò)程中，椎間盤軟骨基質(zhì)也發(fā)生破壞，根據(jù)理論推測(cè)ADAMTS-4參與了脊柱結(jié)核椎間盤的破壞。本研究分析ADAMTS-4，MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-13, MMP-14基因在結(jié)核性椎間盤組織、退行性椎間盤組織和正常椎間盤組織內(nèi)的表達(dá)情況以及差異性，通過(guò)Spearman秩相關(guān)分析MMPs表達(dá)的配對(duì)相關(guān)性，研究闡明脊柱結(jié)核患者椎間盤損害的發(fā)生機(jī)制，為治療脊柱結(jié)核提供一定的理論依據(jù)。本次研究還通過(guò)詳細(xì)調(diào)查各個(gè)脊柱結(jié)核患者的臨床資料，結(jié)合MMPs和ADAMTS-4基因表達(dá)數(shù)據(jù)，分析研究各項(xiàng)基因表達(dá)指標(biāo)與脊柱結(jié)核臨床資料之間的相關(guān)性，為綜合全面的治療脊柱結(jié)核疾病提供理論基礎(chǔ)。2方法2.1脊柱結(jié)核組（TB group）：60例結(jié)核椎間盤組織標(biāo)本取自廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2011年3月1日至2012年4月30日在脊柱骨病外科接受手術(shù)治療的脊柱結(jié)核患者。椎間盤突出組（ID group）：60例退行性椎間盤組織標(biāo)本取自廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2011年3月1日至2012年4月30日在脊柱骨病外科接受手術(shù)治療的椎間盤突出患者。正常組（controlgroup）：60例正常椎間盤組織標(biāo)本取自廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2011年3月1日至2012年4月30日在脊柱骨病外科接受手術(shù)治療的外傷性脊柱骨折患者。實(shí)驗(yàn)樣本獲得以后，由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理學(xué)家對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行檢查，確保樣本的準(zhǔn)確性。所有樣本由外科手術(shù)獲得后，立即放入-80℃液氮中冷凍并保存直至進(jìn)行組織RNA提取。2.2采用組織RNA提取技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real time fluorescentquantitative PCR,RT-PCR）技術(shù)，研究分析ADAMTS-4， MMP-3,-8,-9,-13,-14的mRNA轉(zhuǎn)錄水平在結(jié)核性椎間盤組織、退行性椎間盤組織和正常椎間盤組織內(nèi)的表達(dá)情況以及差異性。通過(guò)Spearman秩相關(guān)分析MMPs表達(dá)的配對(duì)相關(guān)性。2.3采用臨床問(wèn)卷調(diào)查與實(shí)驗(yàn)室檢查相結(jié)合的方式進(jìn)行相關(guān)資料的采集。本次研究選取三組人員的臨床資料包括：年齡，性別，職業(yè)，吸煙習(xí)慣，疼痛強(qiáng)度（視覺(jué)模擬量表評(píng)分，VAS），患病的脊柱節(jié)段，癥狀持續(xù)時(shí)間，C-反應(yīng)蛋白（CRP）和血沉水平（ESR）。結(jié)合MMPs和ADAMTS-4基因表達(dá)數(shù)據(jù)，分析研究各項(xiàng)基因表達(dá)指標(biāo)與脊柱結(jié)核臨床資料之間的相關(guān)性。3結(jié)果3.1RT-PCR結(jié)果顯示，脊柱結(jié)核組和椎間盤突出組的ADAMTS-4表達(dá)顯著增高，與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脊柱結(jié)核組的ADAMTS-4表達(dá)雖然比椎間盤突出組高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。脊柱結(jié)核組和椎間盤突出組的MMP-3表達(dá)增高，與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脊柱結(jié)核組的MMP-3表達(dá)雖然比椎間盤突出組高，但差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。脊柱結(jié)核組的MMP-8表達(dá)顯著增高，與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脊柱結(jié)核組的MMP-8表達(dá)比椎間盤突出組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脊柱結(jié)核組的MMP-9表達(dá)顯著增高，與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脊柱結(jié)核組的MMP-9表達(dá)比椎間盤突出組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脊柱結(jié)核組和椎間盤突出組的MMP-13表達(dá)顯著增高，與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脊柱結(jié)核組的MMP-13表達(dá)比椎間盤突出組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脊柱結(jié)核組和椎間盤突出組的MMP-14表達(dá)顯著增高，與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脊柱結(jié)核組的MMP-14表達(dá)比椎間盤突出組高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.2研究數(shù)據(jù)表明，疾病越嚴(yán)重的脊柱結(jié)核患者的MMPs表達(dá)水平越高。中重度脊柱結(jié)核患者的MMP-3，-8，-9，-14表達(dá)水平顯著增大(P<0.05)。輕中重度脊柱結(jié)核患者的MMP-13的表達(dá)水平均顯著增大(P<0.05)。3.3脊柱結(jié)核組和椎間盤突出組的MMPs表達(dá)具有多重正相關(guān)性。具體而言，脊柱結(jié)核組的MMP-13表達(dá)水平與MMP-8，-9有顯著的正相關(guān)性。此外脊柱結(jié)核組的MMP-8，-9表達(dá)水平之間也存在顯著的正相關(guān)性。3.4脊柱結(jié)核組和椎間盤突出組：ADAMTS-4基因表達(dá)與患者的年齡、性別、職業(yè)、吸煙習(xí)慣、疼痛強(qiáng)度、患病的脊柱節(jié)段、癥狀持續(xù)時(shí)間、C-反應(yīng)蛋白和血沉水平均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。脊柱結(jié)核組： MMP-3基因表達(dá)與吸煙習(xí)慣有正相關(guān)性(P=0.007)。MMP-3基因表達(dá)與患者的年齡、性別、職業(yè)、疼痛強(qiáng)度、患病的脊柱節(jié)段、癥狀持續(xù)時(shí)間、C-反應(yīng)蛋白和血沉水平均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。脊柱結(jié)核組： MMP-8基因表達(dá)與年齡(P=0.011)、疼痛強(qiáng)度(P=0.014)、C-反應(yīng)蛋白(P=0.004)和血沉水平(P=0.002)有正相關(guān)性。MMP-8基因表達(dá)與患者的性別、職業(yè)、患病的脊柱節(jié)段、癥狀持續(xù)時(shí)間等無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。椎間盤突出組：MMP-8基因表達(dá)與年齡(P=0.032)、C-反應(yīng)蛋白(P=0.003)和血沉水平(P=0.005)有正相關(guān)性。MMP-8基因表達(dá)與患者的性別、職業(yè)、吸煙習(xí)慣、疼痛強(qiáng)度、患病的脊柱節(jié)段、癥狀持續(xù)時(shí)間等無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。劇烈疼痛患者（VAS8-10）的MMP-8表達(dá)水平比輕度疼痛患者（VAS0-4）顯著增大(P<0.05)。高CRP患者（>30mg/L）的MMP-8表達(dá)水平比低CRP患者（<10mg/L）顯著增大(P<0.05)。高ESR患者（>40mm/h）的MMP-8表達(dá)水平比低ESR患者（<20mm/h）顯著增大(P<0.05)。脊柱結(jié)核組：MMP-9基因表達(dá)與疼痛強(qiáng)度(P=0.026)、癥狀持續(xù)時(shí)間(P=0.021)、C-反應(yīng)蛋白(P=0.006)和血沉水平(P=0.013)有正相關(guān)性。MMP-9基因表達(dá)與患者的年齡、性別、職業(yè)、患病的脊柱節(jié)段等無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。劇烈疼痛患者（VAS8-10）的MMP-9表達(dá)水平比輕度疼痛患者（VAS0-4）顯著增大(P<0.05)。3–12months癥狀持續(xù)時(shí)間患者的MMP-9表達(dá)水平比<3months癥狀持續(xù)時(shí)間患者顯著增大(P<0.05)。高CRP患者（>30mg/L）的MMP-9表達(dá)水平比低CRP患者（<10mg/L）顯著增大(P<0.05)。脊柱結(jié)核組：MMP-13基因表達(dá)與吸煙習(xí)慣(P=0.019)、疼痛強(qiáng)度(P=0.016)、癥狀持續(xù)時(shí)間(P=0.012)、C-反應(yīng)蛋白(P=0.002)和血沉水平(P=0.009)有正相關(guān)性。MMP-9基因表達(dá)與患者的年齡、性別、職業(yè)、患病的脊柱節(jié)段等均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。劇烈疼痛患者（VAS8-10）的MMP-13表達(dá)水平比輕度疼痛患者（VAS0-4）顯著增大(P<0.05)。3–12months癥狀持續(xù)時(shí)間患者的MMP-13表達(dá)水平比<3months癥狀持續(xù)時(shí)間患者顯著增大(P<0.05)。高ESR患者（>40mm/h）的MMP-13表達(dá)水平比低ESR患者（<20mm/h）顯著增大(P<0.05)。脊柱結(jié)核組和椎間盤突出組：MMP-14基因表達(dá)與患者的年齡、吸煙習(xí)慣、性別、職業(yè)、疼痛強(qiáng)度、患病的脊柱節(jié)段、癥狀持續(xù)時(shí)間、C-反應(yīng)蛋白和血沉水平均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。4結(jié)論4.1本研究證實(shí)椎間盤組織中ADAMTS-4的表達(dá)情況與椎間盤結(jié)核性破壞有關(guān)，推測(cè)ADAMTS-4在脊柱結(jié)核椎間盤破壞的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要的作用。研究證實(shí)退變性腰椎間盤組織的ADAMTS-4表達(dá)顯著增高，ADAMTS-4在椎間盤突出癥的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要的作用。4.2本研究證實(shí)椎間盤組織中MMP-3，-8,-9,-13,-14的表達(dá)情況與椎間盤結(jié)核性破壞有關(guān)，推測(cè)MMP-3，-8,-9,-13,-14在脊柱結(jié)核椎間盤破壞的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要的作用。研究證實(shí)退變性腰椎間盤組織的MMP-3，-13,-14表達(dá)顯著增高，MMP-3，-13,-14在椎間盤突出癥的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要的作用。4.3本次研究證實(shí)MMP-8，-9，-13在椎間盤結(jié)核性破壞的過(guò)程中發(fā)揮了協(xié)同作用。研究證實(shí)MMP-3，-8，-9，-14表達(dá)水平與椎間盤結(jié)核性破壞的嚴(yán)重程度具有相關(guān)性。4.4本研究證實(shí)結(jié)核性椎間盤組織中MMP-3，-13的表達(dá)情況與吸煙習(xí)慣有正相關(guān)性，推測(cè)吸煙是影響脊柱結(jié)核預(yù)后的不利因素。本研究證實(shí)結(jié)核性椎間盤組織中MMP-8,-9，-13的表達(dá)情況與疼痛強(qiáng)度有正相關(guān)性，推測(cè)疼痛可能通過(guò)增加炎性反應(yīng)的途徑，加重脊柱結(jié)核病的病情。本研究證實(shí)結(jié)核性椎間盤組織中MMP-9，-13的表達(dá)情況與癥狀持續(xù)時(shí)間有相關(guān)性，推測(cè)癥狀持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)短是影響脊柱結(jié)核預(yù)后的相關(guān)因素。本研究證實(shí)結(jié)核性椎間盤組織中MMP-8,-9，-13的表達(dá)情況與CRP有正相關(guān)性，推測(cè)高水平的CRP是影響脊柱結(jié)核預(yù)后的不利因素。本研究證實(shí)結(jié)核性椎間盤組織中MMP-8,-9，-13的表達(dá)情況與ESR有正相關(guān)性，推測(cè)高水平的ESR是影響脊柱結(jié)核預(yù)后的不利因素。 

前 言

在當(dāng)今全球范圍內(nèi)結(jié)核病仍是一個(gè)最具威脅性的感染性疾病。我國(guó)是世界全球22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家中的重災(zāi)國(guó)，結(jié)核病感染人數(shù)約占全球結(jié)核病患者人數(shù)的第二位。據(jù)統(tǒng)計(jì)我國(guó)約有4億多結(jié)核桿菌感染者，而且每年約有145萬(wàn)新發(fā)結(jié)核病患者，其中65萬(wàn)患者屬于中高傳染性患者。我國(guó)傳染病死亡患者中，約有13萬(wàn)人死于結(jié)核病，居各類傳染病首位[1-3]。此外，在我國(guó)結(jié)核病患者中，28%的患者屬于耐藥菌感染者，而且許多都是耐多藥結(jié)核桿菌感染。骨關(guān)節(jié)結(jié)核在肺外結(jié)核中發(fā)病率最高，而其中50%屬于脊柱結(jié)核，隨著世界結(jié)核病流行的加劇，脊柱結(jié)核的發(fā)病率也不斷的增高，嚴(yán)重的影響了我國(guó)人民的生命健康[4,5]。
脊柱結(jié)核屬于肺外結(jié)核，是由于脊柱感染結(jié)核桿菌后，造成椎體骨質(zhì)和椎間盤破壞并且伴發(fā)結(jié)核性膿腫形成[6]，約占骨關(guān)節(jié)結(jié)核發(fā)病率的50%-75%。單核細(xì)胞浸潤(rùn)和組織壞死性改變是脊柱結(jié)核主要病理學(xué)改變。脊柱結(jié)核性炎癥早期以滲出性病變?yōu)橹�，此階段患者機(jī)體免疫力低下，結(jié)核菌量多，毒素強(qiáng)，主要表現(xiàn)為漿液纖維素性炎癥。在脊柱結(jié)核發(fā)病后期主要以增生性病變?yōu)橹�，此階段患者機(jī)體免疫力增強(qiáng)，結(jié)核菌量少，主要表現(xiàn)為特征性結(jié)核結(jié)節(jié)形成[7]。在菌量多、毒素強(qiáng)、抵抗力低、變態(tài)反應(yīng)強(qiáng)等因素共同作用下，無(wú)論是早期脊柱結(jié)核還是后期脊柱結(jié)核均可發(fā)生干酪樣壞死[8]。家庭經(jīng)濟(jì)貧困、自身營(yíng)養(yǎng)不良、HIV 病毒感染以及結(jié)核菌耐藥性等多種因素加速了脊柱結(jié)核的傳播。在脊柱結(jié)核發(fā)病早期，感染常發(fā)生于椎體前部，但伴隨疾病的發(fā)展，結(jié)核性感染往往向前縱韌帶方向播散，最終導(dǎo)致鄰近多個(gè)椎體都發(fā)生結(jié)核破壞[9，10]。當(dāng)相鄰椎體均受到結(jié)核破壞時(shí)，椎間盤也將受到破壞，發(fā)生變性壞死。在脊柱結(jié)核發(fā)病的過(guò)程中，不斷破壞的椎體再也不能承受身體重量，繼而發(fā)生塌陷變形，導(dǎo)致患者發(fā)生脊柱后凸畸形[10-13]。當(dāng)破壞的椎間盤以及其他組織發(fā)生液化后，可以形成結(jié)核性膿腫，向后壓迫脊髓，導(dǎo)致患者神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)物理性和化學(xué)性損傷，發(fā)生下肢癱瘓等嚴(yán)重并發(fā)癥[11]。
椎間盤破壞是脊柱結(jié)核的一個(gè)特征性改變。結(jié)核菌導(dǎo)致的椎間盤破壞、塌陷，對(duì)脊髓容易形成壓迫，發(fā)生癱瘓等嚴(yán)重并發(fā)癥，因此脊柱結(jié)核導(dǎo)致的并發(fā)癥和致殘率遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其他的骨關(guān)節(jié)結(jié)核和肺外結(jié)核[12,13]。此外由于耐多藥結(jié)核菌株的不斷增多，治療脊柱結(jié)核的難度愈發(fā)困難。因此研究結(jié)核桿菌引起椎間盤破壞的發(fā)病機(jī)制，對(duì)脊柱結(jié)核防治意義重大。椎間盤發(fā)揮的生物學(xué)功能是：在兩個(gè)相鄰椎體之間維持正常的椎間隙高度，有效對(duì)抗剪切力和壓縮力，使兩相鄰椎體可以進(jìn)行相對(duì)活動(dòng)，并且維持在一個(gè)無(wú)痛范圍內(nèi)。椎間盤組織結(jié)構(gòu)中的蛋白多糖可以通過(guò)吸引水和Mg2+、K+、Ca2+、Na+等正離子，保持調(diào)節(jié)椎間盤組織中的水分和陽(yáng)離子分布，對(duì)椎間盤組織結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定，發(fā)揮重要的作用。此外蛋白多糖還可以結(jié)合膠原或彈性蛋白，形成更為穩(wěn)固的生物結(jié)構(gòu)，發(fā)揮潤(rùn)滑、粘合及緩沖外界壓力等結(jié)締組織的作用。椎間盤負(fù)載下的靜水壓、蛋白多糖形成的滲透壓、一定大小的有效孔徑等三方面作用，共同控制了椎間盤的水分進(jìn)出，使之達(dá)到平衡[14,15]。因此，蛋白多糖的水解情況決定了椎間盤組織水分的保持能力。核心蛋白是人體蛋白多糖的主要功能區(qū)，核心蛋白的一個(gè)重要降解酶是基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metal-loproteinases，MMPs)。
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第一部分 ADAMTS-4 基因在脊柱結(jié)核患者椎間盤組織中的表達(dá)研究

1 引 言
中國(guó)是一個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家，據(jù)統(tǒng)計(jì)中國(guó)人群結(jié)核菌感染率約占44.5% ,每年就有 13 萬(wàn)人左右因結(jié)核病死亡[1，2]。在這其中有 13%的結(jié)核病是骨關(guān)節(jié)結(jié)核，而脊柱結(jié)核發(fā)病率約占骨關(guān)節(jié)結(jié)核發(fā)病率的 50%-75%。脊柱結(jié)核屬于肺外結(jié)核，是由于脊柱感染結(jié)核桿菌后，造成椎體骨質(zhì)和椎間盤破壞并且伴發(fā)結(jié)核性膿腫形成[3,4]。單核細(xì)胞浸潤(rùn)和組織壞死性改變是脊柱結(jié)核主要病理學(xué)改變。脊柱結(jié)核性炎癥早期以滲出性病變?yōu)橹�，此階段患者機(jī)體免疫力低下，結(jié)核菌量多，毒素強(qiáng)，主要表現(xiàn)為漿液纖維素性炎癥。在脊柱結(jié)核發(fā)病后期主要以增生性病變?yōu)橹�，此階段患者機(jī)體免疫力增強(qiáng)，結(jié)核菌量少，主要表現(xiàn)為特征性結(jié)核結(jié)節(jié)形成[5]。在菌量多、毒素強(qiáng)、抵抗力低、變態(tài)反應(yīng)強(qiáng)等因素共同作用下，無(wú)論是早期脊柱結(jié)核還是后期脊柱結(jié)核均可發(fā)生干酪樣壞死[6]。
中國(guó)是一個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家，據(jù)統(tǒng)計(jì)中國(guó)人群結(jié)核菌感染率約占44.5% ,每年就有 13 萬(wàn)人左右因結(jié)核病死亡[1，2]。在這其中有 13%的結(jié)核病是骨關(guān)節(jié)結(jié)核，而脊柱結(jié)核發(fā)病率約占骨關(guān)節(jié)結(jié)核發(fā)病率的 50%-75%。脊柱結(jié)核屬于肺外結(jié)核，是由于脊柱感染結(jié)核桿菌后，造成椎體骨質(zhì)和椎間盤破壞并且伴發(fā)結(jié)核性膿腫形成[3,4]。單核細(xì)胞浸潤(rùn)和組織壞死性改變是脊柱結(jié)核主要病理學(xué)改變。脊柱結(jié)核性炎癥早期以滲出性病變?yōu)橹鳎穗A段患者機(jī)體免疫力低下，結(jié)核菌量多，毒素強(qiáng)，主要表現(xiàn)為漿液纖維素性炎癥。在脊柱結(jié)核發(fā)病后期主要以增生性病變?yōu)橹鳎?a >筆耕文化傳播，此階段患者機(jī)體免疫力增強(qiáng)，結(jié)核菌量少，主要表現(xiàn)為特征性結(jié)核結(jié)節(jié)形成[5]。在菌量多、毒素強(qiáng)、抵抗力低、變態(tài)反應(yīng)強(qiáng)等因素共同作用下，無(wú)論是早期脊柱結(jié)核還是后期脊柱結(jié)核均可發(fā)生干酪樣壞死[6]。
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2 材料和方法
2.1 標(biāo)本來(lái)源
本研究經(jīng)廣西醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所獲得的標(biāo)本均履行告知義務(wù)并簽署知情同意書(shū)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程按照 1964 年赫爾辛基宣言及其后的修正案中列出的道德標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。
脊柱結(jié)核組（TB group）：60 例結(jié)核椎間盤組織標(biāo)本取自廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 2011 年 3 月 1 日至 2012 年 4 月 30 日在脊柱骨病外科接受手術(shù)治療的脊柱結(jié)核患者。脊柱結(jié)核組患者納入標(biāo)準(zhǔn)：具有中度發(fā)熱，肢體乏力，腰痛和下肢肌力減退等脊柱結(jié)核的典型癥狀；患者血液檢查，結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)，組織病理學(xué)檢查和影像學(xué)檢查，如 X 線攝影，計(jì)算機(jī)斷層掃描（CT）和磁共振成像（MRI）均支持脊柱結(jié)核疾病診斷；同時(shí)具有獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS），腫瘤和強(qiáng)直性脊柱炎的患者被排除在外。
椎間盤突出組（ID group）：60 例退行性椎間盤組織標(biāo)本取自廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 2011 年 3 月 1 日至 2012 年 4 月 30 日在脊柱骨病外科接受手術(shù)治療的椎間盤突出患者。椎間盤突出組患者臨床癥狀以及影像學(xué)檢查均符合椎間盤突出癥診斷標(biāo)準(zhǔn)。
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第二部分 MMP-3, -8, -9, -13,-14 基因在脊柱結(jié)核患者椎間盤組織中的表達(dá)研究 ....53-102 
1 引言 ........................53-56 
2 材料與方法......................... 56-63 
3 結(jié)果............ 63-87 
4 討論................. 87-94 
5 結(jié)論 ........................94-95 
6 參考文獻(xiàn) ...................95-102

第三部分 MMPs 和 ADAMTS-4 基因表達(dá)與脊柱結(jié)核患者臨床資料的相關(guān)性分析

1 引 言
在當(dāng)今全球范圍內(nèi)結(jié)核病仍是一個(gè)最具威脅性的感染性疾病。我國(guó)是世界全球22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家中的重災(zāi)國(guó)，結(jié)核病感染人數(shù)約占全球結(jié)核病患者人數(shù)的第二位。據(jù)統(tǒng)計(jì)我國(guó)約有4億多結(jié)核桿菌感染者，而且每年約有145萬(wàn)新發(fā)結(jié)核病患者，其中65萬(wàn)患者屬于中高傳染性患者。我國(guó)傳染病死亡患者中，約有13萬(wàn)人死于結(jié)核病，居各類傳染病首位[1-3]。此外，在我國(guó)結(jié)核病患者中，28%的患者屬于耐藥菌感染者，而且許多都是耐多藥結(jié)核桿菌感染。骨關(guān)節(jié)結(jié)核在肺外結(jié)核中發(fā)病率最高，而其中50%屬于脊柱結(jié)核，隨著世界結(jié)核病流行的加劇，脊柱結(jié)核的發(fā)病率也不斷的增高，嚴(yán)重的影響了我國(guó)人民的生命健康[4,5]。
脊柱結(jié)核屬于肺外結(jié)核，結(jié)核菌通過(guò)血液傳播到易受損害、負(fù)重大的脊柱停留。脊柱具有肌肉附著點(diǎn)少、血流緩慢、松質(zhì)骨多等特點(diǎn)，這些生理特點(diǎn)決定了脊柱是發(fā)病率最高的骨與關(guān)節(jié)結(jié)核，但只有20%的脊柱結(jié)核患者有典型的臨床癥狀[6,7]。脊柱結(jié)核患者的臨床癥狀是否典型決定于患者自身免疫系統(tǒng)是否健全。脊柱結(jié)核的臨床癥狀主要表現(xiàn)為: 脊柱疼痛,后凸畸形，腹部腫塊和脊髓神經(jīng)壓迫癥狀。結(jié)核菌感染的節(jié)段不同，其表現(xiàn)的臨床癥狀也不同。頸椎結(jié)核患者主要表現(xiàn)為頸部疼痛、吞咽不適、上肢肌力減退和頸髓神經(jīng)壓迫癥,患者常伴有肺部炎癥，若不早期治療會(huì)導(dǎo)致截癱等嚴(yán)重并發(fā)癥[8,9]。頸胸段脊柱結(jié)核的臨床癥狀主要以脊髓神經(jīng)壓迫癥狀為主，伴發(fā)下肢麻木無(wú)力，后凸畸形，截癱癥狀。腰椎和腰骶段結(jié)核的臨床表現(xiàn)以腰痛為主。由于腰椎椎管較寬大，脊柱結(jié)核病程在此進(jìn)展較慢,早期不易發(fā)現(xiàn)，等到出現(xiàn)大范圍的椎體破壞, 冷膿腫的形成，神經(jīng)根受到壓迫時(shí)，患者的臨床癥狀才顯著[10]。
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結(jié)論

1 本研究證實(shí)椎間盤組織中 ADAMTS-4 的表達(dá)情況與椎間盤結(jié)核性破壞有關(guān)，推測(cè) ADAMTS-4 在脊柱結(jié)核椎間盤破壞的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要的作用。研究證實(shí)退變性腰椎間盤組織的 ADAMTS-4 表達(dá)顯著增高，ADAMTS-4 在椎間盤突出癥的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要的作用。
2 本研究證實(shí)椎間盤組織中 MMP-3，-8, -9, -13, -14 的表達(dá)情況與椎間盤結(jié)核性破壞有關(guān)，推測(cè) MMP-3，-8, -9, -13, -14 在脊柱結(jié)核椎間盤破壞的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要的作用。研究證實(shí)退變性腰椎間盤組織的MMP-3， -13, -14 表達(dá)顯著增高，MMP-3，-13, -14 在椎間盤突出癥的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要的作用。
3 本次研究證實(shí) MMP-8，-9，-13 在椎間盤結(jié)核性破壞的過(guò)程中發(fā)揮了協(xié)同作用。研究證實(shí) MMP-3，-8，-9，-14 表達(dá)水平與椎間盤結(jié)核性破壞的嚴(yán)重程度具有相關(guān)性。
4 本研究證實(shí)結(jié)核性椎間盤組織中 MMP-3，-13 的表達(dá)情況與吸煙習(xí)慣有正相關(guān)性，推測(cè)吸煙是影響脊柱結(jié)核預(yù)后的不利因素。 本研究證實(shí)結(jié)核性椎間盤組織中 MMP-8, -9 ，-13 的表達(dá)情況與疼痛強(qiáng)度有正相關(guān)性，推測(cè)疼痛可能通過(guò)增加炎性反應(yīng)的途徑，加重脊柱結(jié)核病的病情。本研究證實(shí)結(jié)核性椎間盤組織中 MMP-9 ，-13 的表達(dá)情況與癥狀持續(xù)時(shí)間有相關(guān)性，推測(cè)癥狀持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)短是影響脊柱結(jié)核預(yù)后的相關(guān)因素。本研究證實(shí)結(jié)核性椎間盤組織中 MMP-8, -9 ，-13 的表達(dá)情況與 CRP 有正相關(guān)性，推測(cè)高水平的 CRP 是影響脊柱結(jié)核預(yù)后的不利因素。本研究證實(shí)結(jié)核性椎間盤組織中 MMP-8, -9 ，-13 的表達(dá)情況與 ESR 有正相關(guān)性，推測(cè)高水平的 ESR是影響脊柱結(jié)核預(yù)后的不利因素。
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參考文獻(xiàn)：

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本文編號(hào)：11040