通過在Fenton反應(yīng)體系中加入具有清除·OH活性的維生素C,觀察羥基自由基效應(yīng)是否會減弱或消除,進(jìn)一步探討熒光分光光度法、紫外分光光度法、電子自旋共振法(ESR)測定羥自由基的測定方法。并對上述3種方法測定·OH的可行性和可靠性進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:熒光分光光度法和紫外可見光分光光度法測定羥自由基雖然測定原理涉及多步反應(yīng),但方法簡便、易操作,不涉及大型貴重儀器,適用于定量檢測中低濃度的羥自由基的研究。自旋捕捉-電子自旋共振技術(shù)能夠直接捕捉住目標(biāo)羥基自由基,簡單易行。相比于熒光分光光度法,紫外可見光分光光度法方法具有靈敏度高、反應(yīng)快速、無需對樣品特殊處理等優(yōu)點(diǎn)。

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圖1 熒光分光光度法測定不同濃度維生素C清除·OH曲線

苯甲酸-Fenton體系熒光分光光度法法利用Fenton體系產(chǎn)生·OH，與熒光很弱的苯甲酸反應(yīng)，生成具有強(qiáng)熒光的二羥基苯甲酸。該方法測量簡單、方便、準(zhǔn)確，但是影響熒光強(qiáng)度的因素較多，包括環(huán)境溫度、酸度、溶劑、光照等。另外羥自由基壽命很短，在溶液中大約只能存在微秒級，且濃度很低，因....

圖2 紫外可見光分光光度計(jì)掃描的吸收曲線

紫外分光光度法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：維生素C表現(xiàn)出明顯的清除·OH的活性（見表3）。隨著維生素C濃度的增加，清除能力也逐漸增加。計(jì)算水楊酸-紫外分光光度法測定維生素C清除羥自由基半數(shù)清除率IC50為0.8108mmol/L。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，水楊酸-紫外可見光分光光度法測定羥自由基....

圖3 不同濃度維生素C清除羥自由基的ESR圖譜

電子順磁共振波譜法實(shí)驗(yàn)結(jié)果（見表4）表明：與空白對照相比，維生素C表現(xiàn)出明顯的清除·OH的活性，不同濃度維生素C清除·OH信號見圖3�？梢悦黠@地看出隨著維生素C濃度的增加，羥自由基加合物的信號也明顯減弱，表明其清除能力也逐漸增加。依據(jù)清除率計(jì)算電子順磁共振波譜法測定維生素C清除羥....

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