研究背景:線粒體有它自己的遺傳物質(zhì)和遺傳體系,是一種半自主的細(xì)胞器,它是細(xì)胞內(nèi)氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷(ATP)的主要場所,為細(xì)胞的活動提供能量。microRNA(miRNA)是一類由內(nèi)源基因編碼的長度為20-24個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子,通過和靶基因mRNA堿基配對引起沉默復(fù)合體(RNA-induced silencing complex,RISC)降解mRNA或阻礙其翻譯。早期研究認(rèn)為,miRNAs的工作場所僅為細(xì)胞質(zhì),調(diào)控著核編碼的mRNA的翻譯。近期研究表明,線粒體中也含有豐富的miRNA,這種線粒體定位的miRNA被稱為mitomiRs,盡管其從細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入線粒體的過程尚不清楚,但mitomiR以不同的方式參與調(diào)節(jié)線粒體內(nèi)的蛋白質(zhì)翻譯過程,進(jìn)而影響細(xì)胞的能量供應(yīng)。目的:確定在壓力后負(fù)荷造成的心力衰竭的大鼠模型中,有氧運(yùn)動干預(yù)造成了mitomiR的變化;通過測序技術(shù),發(fā)現(xiàn)若干新的mitomiR,進(jìn)而討論其調(diào)節(jié)線粒體能量代謝的可能作用。方法:1.動物模型的制備。選取雄性Wistar大鼠48只,隨機(jī)分成兩組,24只采取腹主動脈縮窄術(shù)提高大鼠心臟的后負(fù)荷,為腹主動脈縮窄手術(shù)組,簡...

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1.前言
    1.1 相關(guān)概念及定義
        1.1.1 心力衰竭
        1.1.2 有氧運(yùn)動
        1.1.3 線粒體能量代謝
        1.1.4 microRNA(miRNA)及其作用機(jī)理
    1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
        1.2.1 有氧運(yùn)動對于心力衰竭有顯著的干預(yù)效果。
        1.2.2 有氧運(yùn)動對心力衰竭的干預(yù)與線粒體能量代謝功能相關(guān)
        1.2.3 miRNA對心力衰竭中線粒體能量代謝的影響
        1.2.4 mitomiRs對線粒體能量代謝的影響
        1.2.5 mitomiRs對心血管疾病的影響
2.實驗材料及研究方法
    2.1 實驗動物及飼養(yǎng)條件
    2.2 儀器與設(shè)備
    2.3 主要試劑
    2.4 主要試劑的配制方法
    2.5 動物模型的制備及分組
        2.5.1 腹主動脈縮窄手術(shù)方案
        2.5.2 假手術(shù)方案
        2.5.3 有氧運(yùn)動干預(yù)方案
        2.5.4 動物分組
    2.6 實驗動物心臟結(jié)構(gòu)與功能檢測
    2.7 模型動物的處死及取材
    2.8 粗制線粒體的制備
    2.9 超純線粒體的制備
    2.10 線粒體總RNA的制備
    2.11 心肌總RNA的制備
    2.12 細(xì)胞總RNA的制備
    2.13 miRNA高通量測序
    2.14 生物信息分析各組大鼠miRNA測序結(jié)果
        2.14.1 known miRNA分析
        2.14.2 novel miRNA分析
    2.15 蛋白免疫印跡檢測
    2.16 RT-qPCR驗證候選miRNA
    2.17 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
3.實驗結(jié)果與分析
    3.1 以腹主動脈縮窄術(shù)成功建立壓力后負(fù)荷過載的動物模型
    3.2 有氧運(yùn)動干預(yù)顯著改善心衰大鼠的心臟功能
    3.3 有氧運(yùn)動改變定位在線粒體內(nèi)的miRNA的表達(dá)譜
        3.3.1 超純線粒體的質(zhì)量控制
        3.3.2 known miRNA的生物信息學(xué)分析
        3.3.3 novel miRNA的生物信息學(xué)分析
    3.4 候選的novel miRNA在H9C2細(xì)胞中的鑒定
        3.4.1 引物的設(shè)計
        3.4.2 候選miRNA在大鼠心肌細(xì)胞H9C2中的表達(dá)豐度。
4.分析與討論
    4.1 超純線粒體的制備
    4.2 建庫方式選擇
    4.3 高通量測序中known miRNA的篩選
    4.4 高通量測序中novel miRNA的篩選
    4.5 RT-qPCR驗證候選novel miRNA
5.結(jié)論與建議
    5.1 結(jié)論
    5.2 建議
參考文獻(xiàn)
致謝
研究生個人簡歷



本文編號：4040180