發(fā)布時間：2024-06-29 18:21

　　目的:代謝適應(yīng)性對于腫瘤的進(jìn)展至關(guān)重要,Warburg效應(yīng)中癌細(xì)胞優(yōu)先利用乳酸而不是葡萄糖產(chǎn)能時,會模擬葡萄糖饑餓造成細(xì)胞自噬的發(fā)生。然而,乳酸在細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)中是否發(fā)揮作用仍不清楚,因此,本文主要探討乳酸對細(xì)胞自噬的作用及分子機(jī)制。材料與方法:選取人肺癌細(xì)胞A549、H1299和H1688細(xì)胞作為研究對象。(1)通過Western blot探究乳酸在誘導(dǎo)細(xì)胞自噬中beclin1、p62和LC3蛋白表達(dá)量的變化;(2)通過兩種自噬抑制劑3-MA和HCQ探究是否能逆轉(zhuǎn)乳酸誘導(dǎo)的自噬;(3)通過免疫熒光分析自噬體的形成;(4)通過轉(zhuǎn)染beclin1 cDNA和beclin1siRNA,探究乳酸是否通過beclin1誘導(dǎo)細(xì)胞自噬;(5)通過雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)和CHX半衰期實(shí)驗(yàn),探究乳酸在轉(zhuǎn)錄前還是轉(zhuǎn)錄后調(diào)控beclin1蛋白表達(dá);(6)通過轉(zhuǎn)染E3泛素連接酶NEDD4和CO-IP實(shí)驗(yàn),Western blot檢測beclin1的蛋白量;(7)通過解偶聯(lián)劑FCCP和乳酸聯(lián)用,Western blot檢測線粒體自噬相關(guān)蛋白parkin、beclin1、LC3蛋白表達(dá)量;(8)轉(zhuǎn)染beclin...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.4.1不同濃度乳酸對細(xì)胞自噬的影響

皖南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文22結(jié)果1實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.1Westernblot檢測外源乳酸處理對肺癌細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平的作用Westernblot結(jié)果顯示，在A549、H1299、H1688細(xì)胞中加入不同濃度的乳酸，隨著乳酸濃度的增加，自噬相關(guān)蛋白beclin1和LC3表達(dá)量均上升，....

圖1.4.2自噬抑制劑3-MA和HCQ可逆轉(zhuǎn)乳酸誘導(dǎo)的自噬

皖南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文22結(jié)果1實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.1Westernblot檢測外源乳酸處理對肺癌細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平的作用Westernblot結(jié)果顯示，在A549、H1299、H1688細(xì)胞中加入不同濃度的乳酸，隨著乳酸濃度的增加，自噬相關(guān)蛋白beclin1和LC3表達(dá)量均上升，....

圖1.4.3免疫熒光檢測乳酸誘導(dǎo)的自噬流

皖南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文231.3mCherry-GFP-LC3雙標(biāo)檢測乳酸處理下自噬流的變化在A549細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染mCherry-GFP-LC3雙標(biāo)質(zhì)粒，并在轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ)上加入10mM乳酸，雷帕霉素作為陽性對照，共聚焦顯微鏡下觀察自噬體的形成。免疫熒光結(jié)果顯示，與對照組相比，雷帕霉....

圖1.4.4乳酸通過beclin1誘導(dǎo)自噬

皖南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文24圖1.4.4乳酸通過beclin1誘導(dǎo)自噬1.5Westernblot檢測乳酸通過MCT1進(jìn)入細(xì)胞調(diào)控beclin1的表達(dá)Westernblot結(jié)果顯示，與對照組比，乳酸處理后beclin1表達(dá)水平增加，聯(lián)用CHC后，beclin1表達(dá)水平降低。圖1.4....

本文編號：3997834