發(fā)布時(shí)間：2018-02-01 12:05

  本文關(guān)鍵詞： 樟芝 非小細(xì)胞肺癌 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞自噬　出處：《石河子大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:肺癌在全球癌癥死亡率中占據(jù)第一位。非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)在所有類型肺癌中所占比例最大。目前主要用于治療NSCLC的方法是化療法,然而,臨床使用的化療藥物普遍具有較大的毒副作用,且容易產(chǎn)生耐藥性。食藥用真菌在東方有著獨(dú)特的經(jīng)濟(jì)和醫(yī)藥價(jià)值,其天然組分的活性研究更是深得廣大研究學(xué)者的青睞。因此,從食藥用真菌中提取高效低毒的抗腫瘤活性先導(dǎo)化合物,用以研發(fā)新藥將是生物醫(yī)藥界學(xué)者們研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。樟芝是原產(chǎn)于我國臺(tái)灣的一種珍稀藥用菌,具有多種生理活性,尤其是它卓越的抗腫瘤活性。樟芝中的明星分子,安卓喹諾兒,對(duì)NSCLC有很好的抑制作用,目前已進(jìn)入FDA批準(zhǔn)的NSCLC二期臨床實(shí)驗(yàn)。然而,安卓喹諾兒主要來源于樟芝子實(shí)體,由于樟芝依賴生長的牛樟樹是珍稀保護(hù)樹種,且子實(shí)體生長極其緩慢,使得其研究成本居高不下,不利于科研的順利進(jìn)展。液態(tài)深層發(fā)酵具有原料來源廣泛、成本低廉、生長過程短、操作易控制等優(yōu)點(diǎn),從液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中分離純化得到與安卓喹諾兒類似的活性物質(zhì),就成為十分值得開發(fā)的途徑。方法:本研究首先以樟芝液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的粗提物為材料,研究其對(duì)NSCLC的抑制作用,發(fā)現(xiàn)其對(duì)NSCLC有較好的抑制作用,可引起S期細(xì)胞周期阻滯,誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。然而,粗提物是混合物,包含著許多成分不明的活性物質(zhì),很難從中發(fā)現(xiàn)發(fā)揮主要作用的活性單體物質(zhì)。因此,后續(xù)研究采用實(shí)驗(yàn)室前期分離得到的兩種單體化合物By-1和Antrodin C進(jìn)行抗肺癌活性評(píng)價(jià),并進(jìn)一步探究其作用機(jī)制。其中,By-1主要來源于發(fā)酵液,Antrodin C主要來源于發(fā)酵菌絲體。通過對(duì)細(xì)胞遷移、細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白、細(xì)胞自噬等檢測(cè)來評(píng)價(jià)By-1和Antrodin C的抗肺癌活性,并探究自噬和凋亡的交互式調(diào)控是否參與抗肺癌活性中,進(jìn)一步探究作用的信號(hào)通路。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),By-1和Antrodin C均對(duì)非小細(xì)胞肺癌SPCA-1細(xì)胞株有較好的抑制作用,其作用機(jī)制主要是由于引起S期細(xì)胞周期阻滯,上調(diào)P53蛋白,P53參與ROS和Bcl-2介導(dǎo)的線粒體細(xì)胞凋亡途徑,進(jìn)一步引起Caspase家族的級(jí)聯(lián)反應(yīng),促進(jìn)凋亡執(zhí)行因子Caspase-3的釋放,進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。通過檢測(cè)自噬性結(jié)構(gòu),自噬流的發(fā)生以及自噬標(biāo)記蛋白LC3 II表達(dá)和LC3 I向LC3 II轉(zhuǎn)變,發(fā)現(xiàn)By-1和Antrodin C可誘導(dǎo)SPCA-1細(xì)胞發(fā)生自噬。并進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)自噬發(fā)生是通過下調(diào)Akt/mTOR通路來介導(dǎo)的。通過自噬抑制劑和自噬激活劑處理細(xì)胞,對(duì)細(xì)胞增殖的檢測(cè),發(fā)現(xiàn)自噬在By-1和Antrodin C的抗肺癌活性中起保護(hù)性作用。將促凋亡化合物和抑制自噬化合物聯(lián)用,將明顯增加對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制能力,這可能為NSCLC治療提供一條新思路。肺癌細(xì)胞中存在多種類型的基因突變,其中EGFR突變占到了總突變類型的一半以上。有數(shù)據(jù)表明,對(duì)EGFR突變型肺癌,采用靶向性治療的方法,能達(dá)到更好的效果,且預(yù)后良好。通過對(duì)EGFR突變型細(xì)胞株HCC827細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的相關(guān)檢測(cè),發(fā)現(xiàn)By-1和Antrodin C可以抑制該細(xì)胞增殖,將細(xì)胞阻滯在S期,并能誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。本研究采用不同類型的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系探究By-1和Antrodin C的抗肺癌活性及其分子機(jī)制,發(fā)現(xiàn)By-1和Antrodin C對(duì)NSCLC有較好的抑制作用,其作用機(jī)制是由于凋亡和自噬的交互式調(diào)控所致。由此可見,By-1和Antrodin C都有可能發(fā)展成為潛在的抗肺癌治療的化療藥物,這也為后續(xù)的深入研究提供了理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective : To study the antitumor activity of non - small cell lung cancer ( NSCLC ) in all types of lung cancer . It is found that By - 1 and Antrodin C can inhibit the proliferation of NSCLC and induce apoptosis . By detecting autophagy structure , cell cycle and apoptosis , it is found that By - 1 and Antrodin C can inhibit the proliferation of NSCLC and induce apoptosis . By detecting autophagy structure , cell cycle and cell apoptosis , it is found that By - 1 and Antrodin C can induce apoptosis . By detecting autophagy , By - 1 and Antrodin C , it has been found that By - 1 and Antrodin C can induce apoptosis . By means of autophagy , By - 1 and Antrodin C , it is possible to develop a chemotherapeutic agent for the treatment of lung cancer .

【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1481818