四君子湯為治療脾虛證的經(jīng)典方,由人參、白術(shù)、茯苓、炙甘草4味藥組成。前期四君子湯藥效物質(zhì)基礎研究表明,多糖是四君子湯物質(zhì)基礎的重要來源之一,且獲得免疫活性多糖。為溯源活性多糖,開展如下研究:首先依據(jù)復方免疫多糖制備方法,分別分離得到2個人參均一多糖RS-3-1、RS-3-2,3個白術(shù)均一多糖BZ-3-1、BZ-3-2、BZ-3-3,1個茯苓均一多糖FL-3-1和1個甘草均一多糖GC-3-1。分子量范圍在5.42×10～4-5.65×10～4 Da之間。組成單糖種類包括Rha、Ara、Xyl、Man、Glc和Gal,但各自摩爾比不同。采用經(jīng)典途徑抗補體及巨噬細胞RAW264.7考察多糖免疫活性。結(jié)果顯示,各多糖組分和均一多糖具有抗補體活性。其中,BZ-3-1活性最高,CH₅₀為0.482mg/mL。同時RS-3-1、BZ-3-1、FL-3-1、GC-3-1能增強巨噬細胞吞噬作用,促進其NO釋放量,提高腫瘤壞死因子（TNF-α）水平（p<0.05）。采用GC-MS,紅外光譜,甲基化,高碘酸氧化和Smith降解,核磁共振波譜,進一步對活性較好的均一多糖RS-3-1、...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語說明
第一章 緒論
    1 復方四君子湯研究進展
    2 四君子湯多糖研究進展
        2.1 四君子湯復方多糖結(jié)構(gòu)研究
        2.2 四君子湯復方多糖免疫活性研究
    3 復方四君子湯組成各單味藥的多糖研究概況
        3.1 人參多糖結(jié)構(gòu)及免疫作用研究
            3.1.1 人參多糖結(jié)構(gòu)研究
            3.1.2 人參多糖免疫活性研究
        3.2 白術(shù)多糖結(jié)構(gòu)及免疫作用研究
            3.2.1 白術(shù)多糖結(jié)構(gòu)研究
            3.2.2 白術(shù)多糖免疫活性研究
        3.3 茯苓多糖結(jié)構(gòu)及免疫作用研究
            3.3.1 茯苓多糖結(jié)構(gòu)研究
            3.3.2 茯苓多糖活性研究
        3.4 甘草多糖結(jié)構(gòu)及免疫作用研究
            3.4.1 甘草多糖結(jié)構(gòu)研究
            3.4.2 甘草多糖免疫活性研究
    4 本課題研究基礎與方案
        4.1 研究基礎:基于免疫-腸道菌群-多糖代謝物“三聯(lián)效應”法篩選的四君子湯復方活性多糖研究
            4.1.1 四君子湯多糖的制備與分離純化
            4.1.2 基于免疫-腸道微生物-多糖代謝物“三聯(lián)效應”指標的四君子湯活性多糖的篩選
            4.1.3 活性均一多糖的分離純化與結(jié)構(gòu)表征
        4.2 本研究思路——四君子湯復方多糖的溯源研究
第二章 復方四君子湯組成單味藥多糖的提取、分離與純化
    1 材料、試劑與儀器
        1.1 藥材
        1.2 試劑
        1.3 儀器
    2 方法
        2.1 試劑配制
        2.2 單味藥湯劑制備
        2.3 單味藥粗多糖制備
        2.4 單味藥多糖分離與純化
            2.4.1 DEAE-52陰離子交換柱分離
            2.4.2 Sephadex G-100凝膠柱純化
        2.5 單味藥多糖理化性質(zhì)分析
            2.5.1 總糖含量法測
            2.5.2 糖醛酸含量測定
            2.5.3 蛋白含量測定
        2.6 單味藥均一多糖的純度和分子量測定
    3 結(jié)果
        3.1 四君子湯各單味藥粗多糖的分析
        3.2 四君子湯各單味藥多糖的分離與純化
            3.2.1 DEAE-52柱分離結(jié)果分析
            3.2.2 Sephadex G-100柱分離結(jié)果分析
        3.3 均一多糖的理化性質(zhì)及純度
            3.3.1 多糖均一性和分子量
            3.3.2 單味藥均一多糖理化性質(zhì)分析
    4 討論
    小結(jié)
第三章 四君子湯單味藥多糖免疫活性研究
    第一節(jié) 四君子湯單味藥多糖的抗補體活性
        1 材料、試劑與儀器
            1.1 試劑
            1.2 動物
            1.3 儀器
        2 方法
            2.1 均一組分多糖經(jīng)典途徑抗補體溶血作用測定
                2.1.1 溶液配制
                2.1.2 臨界補體濃度的確定
                2.1.3 多糖樣品溶血抑制率測定
        3 結(jié)果
            3.1 單味藥多糖經(jīng)典途徑的抗補體活性
    第二節(jié) 四君子湯單味藥均一多糖對免疫細胞活性的影響
        1 材料、試劑與儀器
            1.1 試劑
            1.2 細胞
            1.3 儀器
        2 方法
            2.1 MTT法檢測均一多糖對巨噬細胞生長的影響
            2.2 中性紅法檢測多糖對巨噬細胞吞噬功能的影響
            2.3 Griess法檢測均一多糖對巨噬細胞分泌NO的影響
            2.4 均一多糖對巨噬細胞產(chǎn)生TNF-α的影響
        3 結(jié)果
            3.1 均一多糖對巨噬細胞生長的影響
            3.2 均一多糖對巨噬細胞吞噬功能的影響
            3.3 均一多糖對巨噬細胞分泌NO的影響
            3.4 均一多糖對巨噬細胞TNF-α生成的影響
        4 討論
    小結(jié)
第四章 四君子湯單味藥均一多糖的結(jié)構(gòu)研究
    1 材料、試劑與儀器
        1.1 試劑2
        1.2 儀器
    2 方法
        2.1 單糖組成測定
        2.2 紫外和紅外分析
        2.3 高碘酸氧化和Smith降解
            2.3.1 高碘酸氧化
            2.3.2 Smith降解
        2.4 甲基化分析
        2.5 NMR分析
    3 結(jié)果
        3.1 單糖組成分析
        3.2 UV和 FT-IR光譜分析
        3.3 高碘酸氧化和Smith降解分析
            3.3.1 高碘酸氧化
            3.3.2 Smith降解
        3.4 甲基化分析
        3.5 NMR圖譜分析
    4 討論
    小結(jié)
總結(jié)與展望
參考文獻
致謝
論文發(fā)表及撰寫情況



本文編號：4049970