目的:采用酶解超濾方法提取鹿角多肽,考察鹿角多肽對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)活性的影響,從而為應(yīng)用鹿角多肽構(gòu)建細(xì)胞支架打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:(1)精制鹿角,選取四種酶分別進(jìn)行酶解,進(jìn)行定性分析和氨基酸分析。(2)采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化制備鹿角多肽,以酶用量、底物濃度、溫度為自變量,多肽含量峰面積為因變量,分別進(jìn)行多元線性回歸和二項(xiàng)式方程擬合,結(jié)合最佳數(shù)學(xué)模型描繪效應(yīng)面,確定最佳工藝并進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。(3)采用超濾提取分子量(800-1500)鹿角多肽;無菌條件下培養(yǎng)傳代BMSCs;篩選最佳濃度;考察最佳濃度鹿角多肽對BMSCs增殖、生長周期、堿性磷酸酶(ALP)的影響。結(jié)果:(1)采用TLC法檢測鹿角膠,檢測結(jié)果符合藥典相關(guān)標(biāo)準(zhǔn);采用胃蛋白酶酶解鹿角膠,可以得到分子量在800-1500鹿角多肽;該鹿角多肽溶液的氨基酸濃度為21.025μmol/m L。(2)星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)選出的最佳工藝條件為酶用量4.0%、底物濃度6%、溫度40℃,最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果,與二項(xiàng)式擬合方程預(yù)測值偏差為1.41%,最佳工藝具...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1鹿角膠的TLC鑒別

蒸干，殘?jiān)?.02mo.02mol/L鹽酸溶液稀釋至試品溶液20μl注入氨基試品與對照品色譜相應(yīng)的在相同位置有明顯相同顏

圖2底物濃度與肽含量面積關(guān)系

5：55：0.1（體積比）；檢測波長：UV220nm；流速：0.5mL/min；柱溫積：10μL）備的樣品溶液在上述色譜條件下分析。然后用GPC數(shù)據(jù)處理軟件，將據(jù)代入校正曲線方程中進(jìn)行計(jì)算，即可達(dá)到樣品中肽的相對分子質(zhì)量及用峰面積歸一化法計(jì)算相對分子質(zhì)量范圍在1000μ以下....

圖3酶用量與肽含量面積關(guān)系

圖3酶用量與肽含量面積關(guān)系度配置底物濃度5%，酶用量2.5%，酶解時(shí)間6h，PH3.5，酶解溫度分、40、45、50℃，酶解。隨著溫度的升高，多肽面積先增加在40℃左右然后降低后繼續(xù)增加。（圖4）圖4溫度與肽含量面積關(guān)系配置底物濃度5%，酶用量2.5%....

圖4溫度與肽含量面積關(guān)系

酶解時(shí)間6h，PH3.5，酶解溫度40℃，酶解。隨著酶用量的增加，出現(xiàn)了先增加再降低，再增加降低的過程，在1.5%左右達(dá)到最高。（圖3）圖3酶用量與肽含量面積關(guān)系度配置底物濃度5%，酶用量2.5%，酶解時(shí)間6h，PH3.5，酶解溫度分別、40、45、50℃....

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