發(fā)布時間：2020-07-07 23:00

【摘要】：中藥藥性理論是中醫(yī)藥基礎理論的核心之一,狹義的中藥藥性是指寒、熱、溫、涼四性,在現(xiàn)代中藥藥性研究中的思路與方法雖然能在一定程度上區(qū)分中藥的四性,但是大多數(shù)利用現(xiàn)代科學探索中藥四性理論的研究都脫離了中醫(yī)基礎理論的整體觀念。生命體的超微弱發(fā)光是機體代謝水平的體現(xiàn),具有整體性。本實驗室前期基于柵藻超微弱發(fā)光對中藥藥性的定量化進行了探索,為了進一步研究,在前期研究的基礎上,基于柵藻超微弱發(fā)光檢測的研究方法對中藥的寒熱藥性進行測定,并檢測更具整體性的中藥灌胃小鼠的自發(fā)發(fā)光強度,建立基于小鼠超微弱發(fā)光檢測研究中藥寒熱藥性的實驗平臺,在不同的角度對中藥藥性的定量化進行探討,比較兩種實驗方法的優(yōu)劣,探索中藥藥性定量化的可行性。研究目的:基于柵藻超微弱發(fā)光檢測測定中藥的寒熱藥性,探討該方法的準確性與重復性;檢測中藥灌胃小鼠的超微弱發(fā)光強度,探索能夠表征中藥寒熱藥性的參數(shù),建立基于小鼠超微弱發(fā)光檢測研究中藥寒熱藥性的實驗平臺,并將小鼠超微弱發(fā)光檢測的參數(shù)與其肝臟生化指標進行相關分析,驗證小鼠超微弱發(fā)光檢測的實驗結果;嘗試尋找基于柵藻超微弱發(fā)光檢測研究中的部分中藥寒熱藥性未鑒別成功的原因,比較基于柵藻超微弱發(fā)光檢測研究中藥藥性的方法和基于小鼠超微弱發(fā)光研究中藥藥性的方法優(yōu)劣,探索中藥藥性客觀定量化指標。研究內(nèi)容:1.基于柵藻超微弱發(fā)光的中藥寒熱藥性測定。選取本實驗室前期通過柵藻生物指示劑法測定的220味中藥中當歸、附子、姜黃、紫蘇梗、仙茅、黃芩、忍冬藤、生梔子、青蒿、地膚子、高良姜、肉蓯蓉、威靈仙、龍眼肉、延胡索、草烏、月季花、地楓皮、燈盞花、千年健、知母、天門冬、板藍根、車前子、葶藶子、漏蘆、茜草、木通、側柏葉、龍膽草,將這30味中藥重復測定,探討基于柵藻超微弱發(fā)光定量化表述中藥寒熱藥性的穩(wěn)定性、重復性以及前期測定結果的可信度。2.基于小鼠超微弱發(fā)光檢測中藥寒熱藥性的初步研究。首先探索了相關實驗條件,包括小鼠的周齡、體重、被毛、檢測部位、灌胃濃度、劑量及時間、麻醉劑量、暗適應時間、儀器檢測相關參數(shù)設置、數(shù)據(jù)結果處理分析等。然后在基于柵藻超微弱發(fā)光重復測定30味中藥藥性的結果之下,對小鼠灌胃并檢測其自發(fā)發(fā)光,研究不同藥性中藥的煎煮液灌胃后小鼠的生物發(fā)光指標是否存在規(guī)律與差異,并與柵藻超微弱發(fā)光重復測定的結果進行比較分析。3.灌胃小鼠肝臟相關生化指標測定。生化指標與機體的代謝水平相關,而生命體的超微弱發(fā)光也與機體的代謝相關,所以利用灌胃小鼠肝臟的相關生化指標,驗證小鼠超微弱發(fā)光檢測中藥藥性的實驗可信度。將超微弱發(fā)光檢測完畢的灌胃小鼠處死,取肝臟,測定其肝臟中超氧化物歧化酶活性(SOD)、總抗氧化能力(T-AOC)、鈉-鉀ATP酶活性(Na~+-K~+-ATPase)、鈣-鎂ATP酶活性(Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase),比較四個生化指標測得的結果,并與灌胃小鼠生物發(fā)光的參數(shù)進行Pearson相關性分析。本文研究結果:1.通過柵藻生物指示劑法測定中藥的寒熱藥性,10味藥性已鑒別成功的中藥(當歸、附子、姜黃、紫蘇梗、仙茅、黃芩、忍冬藤、生梔子、青蒿、地膚子),重復測定的結果與本實驗室前期測量結果保持一致。20味藥性未鑒別成功的中藥(高良姜、肉蓯蓉、威靈仙、龍眼肉、延胡索、草烏、月季花、地楓皮、燈盞花、千年健、知母、天門冬、板藍根、車前子、葶藶子、漏蘆、茜草、木通、側柏葉、龍膽草),其中5味熱性藥(高良姜、肉蓯蓉、威靈仙、龍眼肉、延胡索)、6味寒性藥(知母、天門冬、板藍根、車前子、葶藶子、漏蘆、木通)重復測定結果與本實驗室前期測量結果保持一致,仍然未能成功鑒別其中藥藥性;其他9味藥的重復測定結果或與前期測定結果不同(與藥性相符的,認為鑒別成功),或存在波動等情況,故在后續(xù)小鼠實驗中舍去,同時考慮木通存在較強的肝腎毒性,亦舍去。此結果說明基于柵藻超微弱發(fā)光檢測中藥的寒熱藥性具有一定的穩(wěn)定性和重復性。2.確定小鼠超微弱發(fā)光檢測研究中藥藥性的實驗中KM小鼠的體重、周齡、是否被毛、灌胃藥物濃度與劑量,麻醉劑使用濃度與劑量,暗適應時間、測量時間等一系列基本條件,并在此基礎上確定灌胃小鼠最佳灌胃時間及檢測時間為第6-10天,同時通過數(shù)據(jù)整理與分析發(fā)現(xiàn)灌胃組小鼠與空白組小鼠超微弱發(fā)光檢測所得的腹部與背部自發(fā)發(fā)光強度的比值存在統(tǒng)計學差異。使用10味藥性已鑒別成功的中藥(5味熱性藥、5味寒性藥)和10味藥性未鑒別成功的中藥(5味熱性藥、5味寒性藥)灌胃小鼠一定時間后進行檢測,發(fā)現(xiàn)無論藥性是否能夠通過柵藻超微弱發(fā)光檢測鑒別成功,熱性藥組灌胃小鼠的腹背比值均高于空白對照組,寒性藥組均低于空白對照組,均存在統(tǒng)計學差異。3.通過對小鼠肝臟生化指標的測量,發(fā)現(xiàn)4組生化指標中,基本存在熱性藥組高于寒性藥組的趨勢。在相關性分析中,除少數(shù)藥組(如T-AOC中高良姜、延胡索,SOD中附子、龍眼肉、知母、車前子,Na~+-K~+-ATP酶活性中紫蘇梗、梔子,Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性中黃芩)的生化指標與其腹背自發(fā)發(fā)光強度比值之間無線性相關,其余各藥組生化指標與灌胃小鼠腹背SE強度比值之間存在顯著的相關性。說明中藥灌胃引起小鼠機體代謝水平的變化,綜合表現(xiàn)為超微弱光子輻射的變化,佐證了基于小鼠超微弱發(fā)光檢測中藥藥性的實驗具有一定可信度。結論:灌胃小鼠超微弱發(fā)光檢測實驗結果均與藥典所載中藥藥性相符,與生化指標所示的結果基本相一致,且具有相關性。這兩種方法存在一定的同步性,都具有整體性,與小鼠的代謝水平有關,且其結果都與藥典所載錄藥性相同,并且超微弱發(fā)光檢測的方法存在無創(chuàng)與操作簡便的優(yōu)勢。辨正的來看,灌胃小鼠超微弱發(fā)光檢測,跟生化指標的方法一樣都只能粗略的區(qū)分中藥的寒熱藥性,而無法作為精細區(qū)分寒熱程度的方法應用。相較之下,柵藻生物指示劑法檢測中藥藥性的操作更簡便,成本更低廉,結果更穩(wěn)定,重復性更好、區(qū)分度更高,但目前仍然存在對少部分中藥的寒熱藥性難以鑒別的情況,這可能與中藥材的產(chǎn)地、批次、采收季節(jié)、炮制方式等有關,還需繼續(xù)大量的重復和深入的研究。
【學位授予單位】：濟南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

是一種淡水單細胞綠藻（圖 2.1），對其所在的水體環(huán)境十分敏感，可分多種水質污染，常用作水質評價的指示生物[45]。柵藻作為生物指示劑、靈敏度高、耗時較短，可以作為基礎生物指示劑進行大批量的檢測，發(fā)光檢測的方法可以反映被測樣品的整體信息，符合整體觀念。實驗室的前期實驗中，基于柵藻超微弱發(fā)光的方法檢測了 220 味藥性不[70]，通過對激發(fā)延遲發(fā)光結果的非線性擬合計算出 A、B、C 三個參數(shù)算得出 7 次激發(fā)延遲發(fā)光的 IW值，最后將所得的 7 次激發(fā)延遲發(fā)光平對時間 t 進行線性擬合得到線性方程斜率 K 值[48]，發(fā)現(xiàn)斜率 K 值能夠測性。但限于前期實驗中的種種因素，對于少部分中藥的藥性未能成功鑒方法進行中藥藥性 K 值的重復驗證，探討該法測定中藥藥性的準確性

2.3 實驗結果及分析2.3.1 儀器背景噪聲與系統(tǒng)穩(wěn)定性實驗室室溫恒定至 20℃，YPMS-2 生物光子測量儀的制冷系統(tǒng)的溫度降至-21℃時每天的實驗進行之前我們首先檢測系統(tǒng)的背景噪聲，當背景噪聲均值穩(wěn)定至 10 左，我們認為系統(tǒng)穩(wěn)定。如圖 2.2 所示，以十天的儀器背景噪聲為例，可見，系統(tǒng)的背景噪聲基本穩(wěn)定在 10±1。

圖 2.3 當歸平行樣本與獨立樣本三次測定結果柱狀圖（#p>0.05）2.3 Results of three measurement of the Angelica parallel sample and the independent sam(#p>0.05)平行樣本與獨立樣本三次測定結果如表 2.2 中所示，當歸獨立樣本組三為 9.083、10.624、9.5479，當歸平行樣本組三次測定結果分別為 8.381、8圖 2.3 中我們可以更加直觀的看出，獨立樣本組與平行樣本組三次測量兩組間無統(tǒng)計學差異（p>0.05）。綜合以上實驗結果，兩種實驗方法所得因本部分實驗為驗證柵藻指示劑法中藥藥性 K 值的穩(wěn)定性、重復性與前度，故采用影響因素較多的獨立樣本來進行實驗，使實驗結果更具有說鑒別成功的 10 味寒、熱性中藥藥性K值重復測定期測量已鑒別成功的中藥中，熱性藥從 K 值高向低選取 5 味，分別為當歸、姜黃 8.57、紫蘇梗 7.37、仙茅 7.05，寒性藥從 K 值低向高選 5 味，分

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本文編號：2745737