發(fā)布時(shí)間：2020-07-07 15:44

【摘要】：抑郁癥(Depression)又稱為抑郁障礙,是一種常見的精神障礙性疾病,其臨床表現(xiàn)有心境低落、思維遲緩、意志活動(dòng)減退、認(rèn)知功能損害和一些軀體癥狀,主要包括睡眠障礙、乏力、食欲減退、體重下降等。其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì),改善抑郁癥的治療一直是包括精神科在內(nèi)的眾多學(xué)科的研究熱點(diǎn)。藥物治療是目前治療抑郁癥的主要手段,但抑郁癥是一個(gè)涉及多種機(jī)制的復(fù)雜疾病,近年來抗抑郁藥物的研制雖有很大進(jìn)展,但仍缺乏理想的藥物。近年來研制的新型抗抑郁藥雖然毒性低、不良反應(yīng)少,但低應(yīng)答率及長(zhǎng)期用藥亦可能引起潛在不良反應(yīng)是面臨的主要挑戰(zhàn)。因而尚需深入研究其發(fā)病機(jī)制研究新型治療藥物。烏靈參(Xylariasp)是生長(zhǎng)在土棲白蟻巢中的一種真菌的菌核,具有利尿、補(bǔ)心神、治失眠、治療吐血及產(chǎn)后失血等藥用價(jià)值。烏靈菌粉是采用深層發(fā)酵技術(shù)培養(yǎng)烏靈參菌絲體制成的淺棕色至棕色粉末,其膠囊制劑在臨床主要用于鎮(zhèn)靜安神和抗失眠的治療。烏靈菌粉的抗抑郁、抗焦慮效果在臨床上已經(jīng)得到證實(shí),顯示中醫(yī)藥在這方面的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。為了進(jìn)一步確立這一優(yōu)勢(shì),仍需在作用機(jī)制方面進(jìn)行深入研究。本研究建立了社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)失敗小鼠抑郁癥模型,并通過社交回避反應(yīng)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)觀察烏靈菌粉的抗抑郁作用。結(jié)果表明模型組小鼠在社交回避反應(yīng)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中的社交區(qū)停留時(shí)間比例明顯低于對(duì)照組動(dòng)物(P0.01),而烏靈菌粉治療(低劑量,0.5g/kg、中劑量,1.0g/kg、高劑量,2.0g/kg)后可以顯著提高其社交區(qū)停留時(shí)間比例(P0.05)。同時(shí),模型組小鼠的角落區(qū)停留時(shí)間比例明顯高于對(duì)照組動(dòng)物(P0.01),低、中、高劑量的烏靈菌粉治療后顯著降低了其角落區(qū)停留時(shí)間比例(P0.05)。隨后我們進(jìn)一步在分子水平上對(duì)烏靈菌粉的抗抑郁癥作用機(jī)制進(jìn)行探討。因?yàn)榻鼇碛胁簧傺芯繄?bào)道社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)失敗壓力會(huì)增加嚙齒類動(dòng)物大腦內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)鍵蛋白的表達(dá),于是我們采用Western blotting和qRT-PCR對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比,模型組小鼠大腦海馬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志性蛋白GRP78/Bip和PDI的表達(dá)水平升高(P0.05),而烏靈菌粉治療14 d后其表達(dá)水平顯著降低(P0.05);與正常對(duì)照組相比,模型組小鼠海馬蛋白IRE1α和基因sXBP1的表達(dá)水平顯著增加(P0.05),而烏靈菌粉低、中和高劑量治療14d后其表達(dá)水平顯著降低(P0.05);此外模型組小鼠海馬IRElα的蛋白和sXBP1的基因表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P0.05),烏靈菌粉治療后其表達(dá)水平明顯降低(P0.05);與細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因CHOP轉(zhuǎn)錄水平在模型組小鼠海馬內(nèi)顯著升高,而Bc12/Bax蛋白表達(dá)水平則顯著降低(P0.05),而高劑量的烏靈菌粉顯著降低其表達(dá)水平(P0.05)。上述結(jié)果表明,烏靈菌粉能夠有效改善社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)失敗模型小鼠的抑郁癥狀,具有良好的抗抑郁作用。機(jī)制研究顯示,烏靈菌粉能夠有效維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)進(jìn)而保護(hù)細(xì)胞,恢復(fù)神經(jīng)細(xì)胞正常功能。腦缺血是目前全球致死率位于第二位的腦血管疾病,缺血再灌注損傷是腦缺血重要的病理生理機(jī)制之一。研究證實(shí)腦缺血再灌損傷導(dǎo)致了線粒體廣泛性的進(jìn)行性損傷,自噬是清除損傷線粒體的普遍機(jī)制,腦內(nèi)神經(jīng)元的正常生理活動(dòng)依賴于線粒體產(chǎn)生的ATP作為能量供體。故線粒體的正常功能在腦缺血的多種損傷與修復(fù)階段起到重要作用。目前臨床上腦缺血治療的方案之一是聯(lián)合使用溶栓藥物與神經(jīng)保護(hù)藥物。但如何減少經(jīng)溶栓處理后的再灌注損傷已經(jīng)成為一個(gè)重要問題。到目前為止,尚缺乏療效確切且能夠?qū)�抗腦缺血再灌注損傷的藥物。谷紅注射液是由乙酰谷酰胺和紅花提取液制成的復(fù)方制劑,紅花提取液含有紅花黃色素和紅花苷類等有效成分,其中羥基紅花黃色素A等對(duì)缺血性卒中的保護(hù)作用已被眾多基礎(chǔ)研究所證實(shí)。乙酰谷酰胺是谷胺酰胺乙�；�化的衍生物,研究已表明谷氨酰胺可以對(duì)抗腦缺血引起的神經(jīng)元損傷。目前已有大量的臨床應(yīng)用表明谷紅注射液對(duì)腦缺血患者具有良好的療效,本實(shí)驗(yàn)室的前期研究也顯示,谷紅注射液可以顯著改善實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注損傷大鼠的運(yùn)動(dòng)功能。為進(jìn)一步探討其具體作用機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)采用大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞(middle cerebralarteryocclusion,MCAO)模型,并通過神經(jīng)缺損癥狀評(píng)分和貼紙去除實(shí)驗(yàn)對(duì)谷紅注射液的藥效學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組大鼠神經(jīng)缺損癥狀評(píng)分顯著增加(P0.001),雙側(cè)前肢完全去除貼紙的時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P0.001),經(jīng)過谷紅注射液14 d的治療后,大鼠神經(jīng)缺損癥狀評(píng)分顯著減少且雙側(cè)前肢完全去除貼紙的時(shí)間(P0.05)明顯縮短。然后對(duì)大鼠大腦皮層組織線粒體自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)谷紅注射液治療14 d后可有效上調(diào)Beclin1、Parkin、KIFC2和UCP3蛋白的表達(dá)(P0.05)。綜上,本實(shí)驗(yàn)觀察到谷紅注射液對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷有明顯的保護(hù)作用,而這一作用可能是通過對(duì)線粒體功能的保護(hù)而實(shí)現(xiàn)的。這為谷紅注射液的臨床應(yīng)用以及抗腦缺血的新藥研發(fā)提供了新的理論基礎(chǔ)和新思路。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

后一次應(yīng)激結(jié)束后，將Ｃ５７小鼠單獨(dú)詞養(yǎng)，自由飲食飲水。除正常對(duì)卜，將模型小鼠隨機(jī)分為：模型組（Ｍｏｄｅｌ）、烏靈菌粉低劑量組（Ｗｕｌｉｎｇ，０．５ｇ／ｋｇ）、中劑量組（Ｗｕｌｉｎｇ－Ｍ，邋１．０ｇ／ｋｇ）、高劑量組（Ｗｕｌｉｎｇ－Ｈ，２．ｋｇ）、陽性對(duì)照氟西汀組（Ｆｌｕｏｘｅｔｉｎｅ，邋１０邋ｍｇ／ｋｇ）。每組１５只動(dòng)物。氟于生理鹽水，烏靈菌粉溶于０．５％ＣＭＣ－Ｎａ。正常對(duì)照組和模型組給予的溶媒，每天定時(shí)９點(diǎn)采用灌胃給藥方式給藥一次，連續(xù)給藥２邋ｗ。逡逑物行為學(xué)檢測(cè)逡逑用社交回避反應(yīng)評(píng)價(jià)進(jìn)行小鼠行為學(xué)檢測(cè)（圖１）。最后一次給藥２４邋ｈ行接觸－回避反應(yīng)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)小鼠抑郁情況，社交回避反應(yīng)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)的過ｏｏｋＫＪ等人先前描述的相同［１３］。逡逑交回避反應(yīng)實(shí)驗(yàn)的裝置包括一個(gè)沒有頂端的亞克力盒（４２ｘ４２ｘ５０ｃｍ）場(chǎng)，開場(chǎng)內(nèi)設(shè)有兩個(gè)角落區(qū)（ｃｏｒｎｅｒ邋ｚｏｎｅ）邋（９＞＜９邋ｃｍ）和一個(gè)相互接觸區(qū)（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｚｏｎｅ）邋（２４ｘ１４ｃｍ），交流區(qū)內(nèi)放有一個(gè)一端為空的絲網(wǎng)克力長(zhǎng)方體（１０ｘ８ｘ５０邋ｃｍ）。逡逑

粉對(duì)ＳＤＳ模型小鼠海馬內(nèi)ＧＲＰ７８和ＰＤ丨蛋白表達(dá)ｕｌｉｎｇ邋ｐｏｗｄｅｒ邋ｔｒｅａｔｍｅｎｔ邋（０．５，邋１．０邋ｏｒ邋２．０邋ｇ／ｋｇ，邋Ｆｌｕｏｘｅ，邋２邋＼ｖ）邋ｏｎ邋ＧＲＰ７８邋ａｎｄ邋ＰＤＩ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｉｎ邋ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓＰ７８邋ｉｎ邋ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ邋ｉｎ邋ｅａｃｈ邋ｇｒｏｕｐ邋ｕｓｉｎｇ邋ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔｔｉｎｇＩ邋ｉｎ邋ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ邋ｉｎ邋ｅａｃｈ邋ｇｒｏｕｐ邋ｕｓｉｎｇ邋ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔｔｉｎｇｎｓｉｔｙ邋ｗａｓ邋ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ邋ｔｏ邋Ｐ－ａｃｔｉｎ．邋Ａｌｌ邋ｔｈｅ邋ｖａｌｕｅｓ邋ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｇｒｏｕｐ，邋＊Ｐ邋＜邋０．０５邋ｖｅｒｓｕｓ邋Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ；邋ｎＰ邋＜邋０．０５，邋ＵＵＰ邋－ｗａｙ邋ＡＮＯＶＡ邋ｆｏｌｌｏｗｅｄ邋ｂｙ邋Ｌｅａｓｔ邋Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ邋Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ邋ＳＤＳ模型小鼠海馬ＥＲＳ下游通路的影響逡逑邋ｂｌｏｔｔｉｎｇ和ｑＲＴ－ＰＣＲ方法對(duì)ＥＲＳ下游通路的具體。結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組小鼠海馬蛋白ＩＲＥｌａ的表達(dá)水靈菌粉中劑量（１．０ｇ／ｋｇ）和高劑量（２．０ｇ／ｋｇ）治＜．４４ＢＸＢＰｌ

表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組小鼠海馬蛋白ＩＲＥｌａ的表達(dá)水平也顯著增加逡逑（Ｐ＜０．０５），而烏靈菌粉中劑量（１．０ｇ／ｋｇ）和高劑量（２．０ｇ／ｋｇ）治療１４ｄ后其表逡逑達(dá)水平顯著降低（尸＜０．０５）（圖４Ａ）；如圖４Ｂ所示，海馬內(nèi)ｓＸＢＰｌｍＲＮＡ的表達(dá)逡逑水平明顯高于對(duì)照組（Ｐ＜0．0５），烏靈菌粉治療后其表達(dá)水平明顯降低（／＞＜０．０５）。逡逑此外，模型組小鼠海馬內(nèi)的Ｐ－ｅＩＦ２ａ的蛋白表達(dá)呈上調(diào)趨勢(shì)，而烏靈菌粉治療后呈逡逑下調(diào)趨勢(shì)（圖５Ａ）；而從ｑＲＴ－ＰＣＲ的結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)模型組小鼠海馬內(nèi)的ＡＴＦ４基逡逑因表達(dá)水平顯著上升（Ｐ＜0．0５）

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2745302