發(fā)布時(shí)間：2020-07-07 01:18

【摘要】：目的:本研究采用脂質(zhì)組學(xué)分析方法,觀察去卵巢大鼠與正常大鼠血漿的脂質(zhì)代謝特征,篩選與絕經(jīng)期大鼠有關(guān)的差異脂質(zhì)代謝物,通過脂質(zhì)代謝物相對(duì)含量的變化,分析絕經(jīng)期大鼠體內(nèi)的脂質(zhì)代謝狀態(tài)以及與老年性疾病的聯(lián)系,從代謝物含量變化和代謝通路深入研究清心滋腎湯對(duì)絕經(jīng)期的脂質(zhì)代謝調(diào)控,期望從脂代謝物水平上揭示清心滋腎湯對(duì)絕經(jīng)綜合征調(diào)控機(jī)制,為進(jìn)一步開發(fā)利用清心滋腎湯奠定理論基礎(chǔ)。方法:將4月齡雌性SD大鼠60只,隨機(jī)分為空白組和去卵巢組,空白組行假手術(shù)即只打開盆腔,不切除卵巢;去卵巢組均行“雙側(cè)卵巢切除術(shù)”,通過大鼠陰道脫落細(xì)胞涂片觀察造模結(jié)果。術(shù)后將去卵巢大鼠隨機(jī)分為5組:模型組(M組)、清心滋腎湯低劑量組(D組)、清心滋腎湯中劑量組(Z組)、清心滋腎湯高劑量組(G組)、莉芙敏組(Y組),加上空白組(K組),共6組。分別灌胃4周,末次給藥禁食24小時(shí)后,用10%水合氯醛按照每公斤體重0.35ml對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉,行頸動(dòng)脈取5ml血至采血管,離心機(jī)以3000轉(zhuǎn)/分速度離心20分鐘,取血清,備用。采用超高效液相色譜-線性離子阱/靜電場(chǎng)軌道阱結(jié)合高分辨質(zhì)譜法(UPLC/LTQ-Orbitrap-MS)對(duì)各組血漿進(jìn)行檢測(cè)。通過主成分分析(PCA)、正交-偏最小二乘法分析(OPLS-DA)以及差異倍數(shù)(FC)尋找模型組與空白組之間的差異脂質(zhì)代謝物,根據(jù)檢出的精確分子質(zhì)量和質(zhì)合比信息,同時(shí)結(jié)合碎片離子信息,搜索chemspider數(shù)據(jù)庫,完成代謝產(chǎn)物的鑒定,將所得的差異代謝物輸入KEGG數(shù)據(jù)庫查找相關(guān)代謝通路。運(yùn)用多元統(tǒng)計(jì)分析比較這些差異脂質(zhì)代謝物在清心滋腎湯各劑量組及莉芙敏組大鼠體內(nèi)相對(duì)含量是否有變化,由此推測(cè)清心滋腎湯對(duì)去卵巢大鼠的治療作用機(jī)制。結(jié)果:1.采用PCA方法對(duì)模型組與空白組大鼠樣本建模,大部分樣本集中分布于散點(diǎn)圖的橢圓形95%置信區(qū))區(qū)域內(nèi),有一定的分離趨勢(shì),但仍存在交叉重疊,進(jìn)一步建立OPLS-DA模型,參數(shù)分別為:血漿(正離子模型):R2Y=0.996,Q2=0.789;血漿(負(fù)離子模型):R2Y=0.999,Q2=0.694。R2Y表示模型的解釋率,Q2表示模型的預(yù)測(cè)率。上述參數(shù)可以看出本實(shí)驗(yàn)建立的模型有較高的可靠性,OVX大鼠模型建立成功。2.對(duì)模型組和空白組大鼠血漿進(jìn)行脂質(zhì)組學(xué)分析,以O(shè)PLS-DA模型中VIP1及單變量統(tǒng)計(jì)分析P0.05的脂質(zhì),并計(jì)算變異倍數(shù)(FC)1.2,作為顯著性差異脂質(zhì)。實(shí)驗(yàn)揭示了與絕經(jīng)綜合征相關(guān)的差異代謝物,血漿中顯著性差異脂質(zhì)一共9類,共76種脂質(zhì)化合物。包括:12種神經(jīng)酰胺(Cers),29種鞘磷脂(SMs),5種甘油三酯(TGs),5種溶血磷脂酰膽堿(LPCs),2種脂肪酸(FAs),1種血小板活化因子(PAF),其相對(duì)含量上升,與空白組對(duì)比(p0.05);4種磷脂酰甘油(PGs),4種磷脂酰絲氨酸(PSs),14種甘油二酯(DGs),其相對(duì)含量下降,與空白組對(duì)比(p0.05)。3.將差異脂質(zhì)代謝物進(jìn)行代謝通路查詢后發(fā)現(xiàn),有6條代謝通路與絕經(jīng)綜合征相關(guān),包括:甘油磷脂代謝,鞘脂代謝,甘油酯代謝,膽固醇代謝,醚脂代謝和不飽和脂肪酸合成。4.通過比較清心滋腎湯給藥前后大鼠的脂質(zhì)代謝物相對(duì)含量的變化,發(fā)現(xiàn)清心滋腎湯能夠調(diào)控多個(gè)與絕經(jīng)綜合征有關(guān)的脂質(zhì)差異代謝物的紊亂。鑒定出了清心滋腎湯干預(yù)去卵巢大鼠后血漿代謝相關(guān)的5類差異脂質(zhì),能夠上調(diào)2種指標(biāo),下調(diào)3種指標(biāo),以上指標(biāo)相對(duì)含量的差異與模型組相比存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。結(jié)論:1.UPLC/LTQ-Orbitrap-MS代謝組學(xué)能夠初步區(qū)分正常大鼠與絕經(jīng)期大鼠兩種不同的脂代謝狀態(tài)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)有76種差異脂質(zhì)化合物的相對(duì)含量變化與絕經(jīng)綜合征脂代謝紊亂相關(guān),這些代謝物的水平變化可作為與絕經(jīng)相關(guān)的老年性退化性疾病的預(yù)測(cè)標(biāo)記物。2.去卵巢大鼠存在甘油磷脂代謝,鞘脂代謝,甘油酯代謝,膽固醇代謝,醚脂代謝和不飽和脂肪酸合成的紊亂。3.清心滋腎湯能一定程度調(diào)節(jié)絕經(jīng)綜合征所引起的脂質(zhì)紊亂狀態(tài),主要通過調(diào)節(jié)甘油磷脂代謝、鞘脂代謝以及甘油酯代謝發(fā)揮治療作用。4.通過清心滋腎湯給藥后這些代謝物相對(duì)含量的變化以及代謝通路的調(diào)控,揭示了清心滋腎湯一個(gè)重要的治療機(jī)制是預(yù)防并延緩絕經(jīng)后心腦血管疾病、阿茲海默癥、糖尿病以及代謝性疾病的發(fā)生,為進(jìn)一步的藥理學(xué)研究提供思路。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

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圖２－６．Ｄ－Ｍ兩組的ＰＣＡ得分圖（ＥＳＩ邋－）逡逑３．２．３邋ＥＳＩ＋ＥＳ卜ＺＭＰＣＡ

圖１０．邋Ｇ－Ｍ兩組的ＰＣＡ得分圖（ＥＳＩ邋－）逡逑

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8 趙s

本文編號(hào)：2744421