發(fā)布時間：2020-07-04 10:19

【摘要】：目的:探討在阿霉素(ADR)誘導HK-2人腎小管上皮細胞發(fā)生氧化損傷后,紫蘇葉水提取物(PFAE)對其細胞活性、氧化損傷標記物及細胞凋亡等關鍵因子的影響。方法:ADR刺激HK-2細胞建立損傷模型,篩選紫蘇葉不同溶劑提取物對細胞活性的影響,選擇最佳溶劑提取物PFAE進行后續(xù)實驗。使用陽性藥物N-乙酰半胱氨酸(NAC)或不同濃度PFAE(5,15,45 g·L~(-1))干預后,采用細胞增殖/毒性檢測(CCK-8)法檢測細胞存活率,結合光鏡下細胞形態(tài)變化,篩選出PFAE保護細胞的最佳濃度。后續(xù)實驗分為6組:空白組,ADR(0.05 g-L~(-1))組,PFAE(15 g·L~(-1))組,ADR+PFAE(0.05+15 g·L~(-1))組,NAC(0.81 g·L~(-1))組,ADR+NAC(0.05+0.81 g·L~(-1))組。檢測細胞勻漿中的丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)和細胞總抗氧化能力,2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)熒光探針檢測細胞內(nèi)活性氧(ROS)水平,流式細胞術及脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TUNEL)染色法檢測細胞凋亡率,蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測細胞線粒體凋亡相關蛋白B淋巴細胞瘤-2基因(Bcl-2),Bcl-2相關X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9和3(Caspase-9,Caspase-3)、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)包括其剪切體的表達,檢測絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號轉導通路中p38絲裂素活化蛋白激酶(p38 MAPK),細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK),c-Jun氨基端激酶(JNK)及其磷酸化蛋白的表達。結果:①與空白組比較,ADR組的細胞活性顯著降低(P0.01),與ADR組比較,5,15 g.L~(-1)的PFAE和NAC能促進細胞的增殖(P0.01),其中濃度為15 g·L~(-1)時保護作用最明顯。②與空白組比較,ADR組抗氧化能力和SOD水平顯著降低(P0.01),MDA和ROS的水平顯著增高(P0.01),與ADR組比較,ADR+PFAE組和ADR+NAC組抗氧化能力和SOD水平顯著升高(P0.01),MDA和ROS的水平顯著下降(_P0.01)。③與空白組比較,ADR組細胞凋亡率上升(P0.01),凋亡相關蛋白Bax/Bcl-2,cleaved Caspase-9/Caspase-9,cleaved Caspase-3/Caspase-3,cleaved PARP/PARP水平顯著上升(P0.01),MAPKs通路中的p38 MAPK,ERK和JNK的磷酸化蛋白表達明顯增高(P0.01,P0.01,P0.05);與ADR組比較,PFAE或NAC干預后減輕了細胞凋亡率,降低了凋亡蛋白的相對比值,并且抑制了MAPK信號通路中p38 MAPK,ERK蛋白的磷酸化(P0.01),但對磷酸化的JNK蛋白表達無影響。結論:PFAE可以減輕ADR誘導的HK-2細胞氧化損傷,并發(fā)揮抗氧化作用,通過線粒體凋亡途徑和ERK/p38 MAPK信號通路來抑制細胞凋亡。
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

細胞活性逐漸下降（尸均＜０．０１邋）。當ＡＤＲ刺激２４ｈ、濃度為０．０５邋ｇ‘１／１時，ＨＫ－２逡逑細胞活性在５３．９２％左右，本研究選用此濃度作為后續(xù)ＡＤＲ誘導ＨＫ－２細胞損傷模型的劑逡逑量。見圖１－１－１。逡逑２２逡逑

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本文編號：2740999