發(fā)布時間：2020-07-04 07:34

【摘要】：目的:以線粒體能量代謝為切入點,探討化瘀祛痰方對動脈粥樣硬化家兔肝臟脂質沉積的影響及機制,豐富“痰瘀論治”AS的科學內涵。材料與方法:90只SPF級健康雄性新西蘭白兔,適應性喂養(yǎng)2周后,隨機分為正常對照組、模型組、化瘀祛痰方高劑量組、化瘀祛痰方中劑量組、化瘀祛痰方低劑量組、辛伐他汀組,每組15只。正常對照組喂飼普通飼料同時耳緣靜脈注射生理鹽水,其他組喂飼高脂飼料同時耳緣靜脈注射牛血清白蛋白生理鹽水溶液造動脈粥樣硬化模型,各組均自由攝食,飲水不限。8周后,各治療組給予相應藥物進行干預治療,給藥劑量按照人和動物體表面積折算系數進行換算。正常對照組與模型組給予相同體積的生理鹽水,灌胃給藥,每天1次,連續(xù)給藥4周后取材。全自動生物化學分析儀檢測血清膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的含量;HE染色、油紅O染色,觀察肝組織形態(tài)學改變;比色法檢測家兔肝臟線粒體呼吸鏈酶復合物活性;Blue-Native-Page法檢測線粒體呼吸鏈酶復合物含量;ELISA法檢測肝臟ATP含量;PCR array法檢測肝臟線粒體能量代謝相關基因m RNA變化情況;Western Blot法檢測線粒體能量代謝相關蛋白。結果:1.化瘀祛痰方對AS家兔血脂水平的影響與正常對照組相比,模型組家兔血清中TC、TG、LDL-C顯著升高(P0.01),HDL-C顯著降低(P0.01);與模型組相比,各治療組家兔血清中TC、TG、LDL-C顯著降低(P0.01),HDL-C顯著升高(P0.01),其中以化瘀祛痰方高劑量組與辛伐他汀組治療效果較佳(P0.01或P0.05)。2.化瘀祛痰方對AS家兔肝臟組織形態(tài)學變化及肝臟脂質沉積的影響與正常對照組相比,模型組家兔肝臟組織細胞腫脹明顯、大量脂肪空泡清晰可見,胞漿內有明顯的橘紅色脂滴蓄積;與模型組相比,各給藥組肝臟脂肪空泡樣變性及脂質沉積均有不同程度改變。其中以化瘀祛痰方高劑量組與辛伐他汀組改善肝臟脂質沉積效果最佳。因此后續(xù)實驗僅選擇治療效果較佳的化瘀祛痰方高劑量組進行下一步的研究。3.化瘀祛痰方對AS家兔肝臟線粒體能量代謝的影響線粒體呼吸鏈酶復合物活性實驗結果顯示:與正常對照組相比,模型組肝臟線粒體呼吸鏈酶復合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性降低(P0.05),與模型組比較,化瘀祛痰方高劑量組與辛伐他汀組肝臟線粒體呼吸鏈酶復合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性升高(P0.05)。Blue-Native-Page結果顯示:與正常對照組相比,模型組肝臟線粒體呼吸鏈酶復合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ含量降低(P0.05),與模型組比較,化瘀祛痰方高劑量組與辛伐他汀組肝臟線粒體呼吸鏈酶復合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ含量升高(P0.05)。ELISA結果顯示:與正常對照組相比,模型組家兔肝臟內ATP生成減少(P0.01);與模型組相比,化瘀祛痰方高劑量組與辛伐他汀組家兔肝臟組織ATP生成增加(P0.05或P0.01)。4.化瘀祛痰方對線粒體能量代謝相關基因m RNA及蛋白的影響PCR array結果顯示:與正常對照組相比,模型組73個基因m RNA發(fā)生改變(上調67個,下調6個);與模型組相比,化瘀祛痰方組80個基因m RNA發(fā)生改變(10個上調,70個下調)。在模型組上調的67個基因m RNA中,有46個基因m RNA在治療后表達趨勢發(fā)生逆轉。Western Blot結果顯示:與正常對照組相比,模型組NDUFS1、NDUFS2、UQCRC1、UQCRC2、ATP5C1、COX4I1、COX6B1蛋白表達含量下降(P0.05或P0.01);與模型組相比,化瘀祛痰方組NDUFS1、NDUFS2、UQCRC1、UQCRC2、ATP5C1、COX4I1、COX6B1蛋白表達升高(P0.05或P0.01)。結論:1.化瘀祛痰方能夠降低AS家兔血脂水平改善其肝臟脂質沉積。2.化瘀祛痰方能夠通過增加肝臟線粒體呼吸鏈酶復合物活性及含量表達進而促進ATP生成量。3.化瘀祛痰方可能通過調節(jié)線粒體能量代謝相關基因m RNA與蛋白的表達,以及改善AS家兔肝臟脂質沉積,進而防治動脈粥樣硬化。
【學位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

- 26 -圖 1 各組 AS 家兔血清血脂變化情況2. 各組 AS 家兔肝臟組織 HE 染色結果實驗結果顯示：正常對照組肝細胞索條理清晰排列整齊，肝竇正常，核圓、大、居中，未見小葉內炎癥細胞浸潤；與正常對照組相比，模型組肝細胞體積增大，腫脹變圓，胞漿內出現大量脂肪空泡，脂肪變性明顯，肝細胞排列雜亂；與模型組相比，各治療組肝細胞的體積大小有所恢復，細胞腫脹明顯減輕，空泡變少，肝細胞脂肪變性程度減輕，其中以化瘀祛痰方高劑量組與辛伐他汀組改善肝脂肪變性效果最為顯著。（見圖 2）

圖 2 各組 AS 家兔肝臟 HE 染色結果（200x）3. 各組 AS 家兔肝臟油紅 O 染色結果實驗結果顯示：與正常對照組相比，模型組肝細胞內出現明顯的橘紅色脂滴，脂滴數量多彌漫臟臟組織內；與模型組相比，各治療組胞漿內橘紅色脂滴蓄積情況呈不同程度減輕，脂肪變性程度有所恢復。其中以化瘀祛痰方高劑量組與辛伐他汀組治療效果最佳。（見圖 3）。

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本文編號：2740835